Électrophorèse des protéines est une technique de gel électrophorétique permettant l'analyse d'un mélange de protéines. Le gel utilisé est composé d'acrylamide, qui polymérise pour former un réseau maillé. L'électrophorèse sur gel permet de séparer les protéines pour leur analyse et repose sur la capacité des protéines chargées à migrer à travers le réseau du gel lorsqu'un courant électrique est appliqué.
L'analyse d'un mélange par électrophorèse sur gel est réalisée sur des protéines dénaturées, c'est-à-dire des protéines ayant perdu leurs structures tertiaire et secondaire. Un détergent anionique recouvre les chaînes polymères dénaturées, leur conférant une charge (rapport charge/aminoacide constant). Les protéines individuelles d'un mélange complexe sont ainsi recouvertes de charges négatives. Lorsqu'une tension continue est appliquée entre les extrémités d'un gel contenant le mélange protéique, les protéines migrent à travers les mailles du gel.
Principes de séparation
- Poids moléculaire : Le maillage du gel retient davantage les molécules de grande taille que les petites. Les molécules de faible poids moléculaire migrent plus rapidement à travers le gel.
- Densité du gel : La résolution de séparation peut être ajustée en utilisant des gels de densité différente.
- Marqueur de poids moléculaire : Utilisé pendant la migration pour fournir une échelle de référence, permettant de déterminer la taille de chaque protéine.
Visualisation des protéines
Après migration, les protéines sont visualisées à l'aide de colorants spécifiques. Le colorant le plus couramment utilisé est le bleu de Coomassie, mais la coloration à l'argent est également possible. Les marqueurs de poids moléculaire aident à déterminer la taille des protéines présentes dans le mélange.
