Essais basés sur les rapporteurs

Essais basés sur les rapporteurs

Les tests basés sur des rapporteurs sont des tests biologiques utilisés pour mesurer la capacité de régulation d'une séquence d'ADN inconnue, étudier la régulation des gènes par des facteurs agissant en cis ou en trans, ou mesurer l'activation des voies de signalisation cellulaire.

 Dans ces essais, la séquence promotrice inconnue est liée à un gène rapporteur facilement détectable dont le produit peut être facilement détecté et mesuré de manière quantifiable. Les niveaux d'expression du gène rapporteur sont contrôlés par la quantification de l'activité enzymatique de la protéine rapporteur, qui est utilisée pour caractériser les séquences régulatrices, l'activité des facteurs de transcription, la signalisation cellulaire ou les voies de signalisation. 

Les gènes rapporteurs les plus courants sont la bêta-galactosidase, la luciférase, la bêta-lactamase, la phosphatase alcaline et la GFP (protéine à fluorescence verte).  

Les luciférases sont utilisées pour créer des essais bioluminescents qui sont hautement quantitatifs, sensibles dans une large gamme dynamique et facilement détectés par la mesure de la lumière émise. 

La plupart des essais de gènes rapporteurs impliquent un ou deux gènes rapporteurs, le second étant exprimé à partir d'un vecteur "de contrôle" pour normaliser les résultats du gène rapporteur expérimental. 

Le gène rapporteur de contrôle est généralement piloté par un promoteur constitutif et le vecteur de contrôle est co-transfecté avec le rapporteur expérimental. 

Les cellules sont exposées à différents facteurs ou conditions, dont l'effet peut être facilement suivi en mesurant les changements dans l'émission de lumière. Diverses méthodes de détection, telles que la luminescence, l'absorbance et la fluorescence, sont utilisées pour mesurer l'expression de la protéine du gène rapporteur. 

Les tests de rapporteur peuvent également être utilisés pour évaluer quantitativement l'activité de l'ARNi et identifier les modulateurs de l'ARNi. Ils peuvent également être utilisés pour cribler les produits chimiques qui perturbent la signalisation androgénique.

Les cellules rapporteuses utilisent la transfection transitoire pour garantir des résultats fiables et précis, et les cellules sont optimisées pour fournir les meilleures conditions expérimentales avec les réactifs fournis dans les kits, ce qui permet de standardiser facilement les expériences.
Les kits d'essai basés sur les cellules rapporteuses offrent une sensibilité et une plage dynamique optimales lors de la quantification de l'activité des récepteurs, ce qui en fait un service de criblage fiable et rentable pour les composés pharmaceutiques, les produits chimiques ou les échantillons environnementaux.

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RUOCE / IVD
  • Unconjugated 11
  • human 9
  • mouse 1
  • kit 306
  • Cell line 18
  • Protein/peptide 9
  • Inhibitor/Antagonist/Agonist 4
  • cell culture products 2
  • Other products 1
  • all species 4
  • Assay 12
  • FA 7
  • Cell culture 4
  • FC 3
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