Kits de préparation conventionnelle de banques ADN pour Illumina®

Kits de préparation conventionnelle de banques ADN pour Illumina®

Méthode classique avec optimisation de l'efficacité

Temps total : 3.5 heures avec PCR et 3.0 heures sans PCR

Principe :
Il est nécessaire d'utiliser un ADN fragmenté comme échantillon initial :

1. Réparation des extrémités
La fragmentation de l'ADN n'entraînant pas de fragments homogènes, à extrémités franches, une réparation des extrémités est nécessaire pour s'assurer que chaque molécule est exempte de surplombs et contient des groupes 5 'phosphate et 3' hydroxyle.

2. Polyadénylation
La polyadénylation consiste en l'addition d'une queue poly(A), une succession de nombreux ribonucléotides de type Adénosine (A) à l'extrémité 3'. Cette étape permet de facilité l'étape suivante de liaison des adaptateurs.

3. Liaison des adaptateurs
Les adaptateurs (petites séquences d'ADN synthétique double brin) sont alors liés à ces fragments avec l'aide d'une ADN ligase. Les adaptateurs permettent à la séquence de se lier au support mais également d'identifier l'échantillon analysé grâce aux indexes. Les adaptateurs contiennent des motifs nécessaires pour les étapes suivantes (amplification clonale et séquençage)

4. Amplification de la banque
L'amplification de la banque est nécessaire pour que le signal reçu par le séquenceur soit assez puissant pour être détecté avec précision. La technologie Illumina utilise la méthode "Bridge PCR". Cette étape peut être évitée avec les kits dit "PCR-free"

Liste des produits

Référence
Description
Cond.
Prix H.T.