Les clones cDNA sont des cellules bactériennes contenant des plasmides avec des copies ADN de séquences d’ARNm. Ces clones permettent aux chercheurs d’étudier et d’exprimer des gènes eucaryotes dans des systèmes bactériens tout en préservant l’intégrité de la séquence originale d’ARNm.
Une molécule d’ADNc (ADN complémentaire) est une copie exacte en ADN d’un transcript d’ARNm. L’ADNc est inséré dans un vecteur approprié, qui est ensuite introduit dans une cellule bactérienne sans perturber les fonctions cellulaires normales. La bactérie résultante portant le plasmide contenant l’ADNc est appelée clone cDNA.
Obtenir de l’ADNc à partir d’ADN génomique double brin est difficile, c’est pourquoi la plupart des clones cDNA proviennent de séquences d’ARNm matures de cellules eucaryotes. Ces clones fournissent des modèles précis pour les études d’expression génique, la production de protéines et les analyses fonctionnelles.
Clones de cadre de lecture ouvert (ORF)
Un clone ORF est un plasmide contenant un insert ADN qui code pour une protéine complète. L’insert comprend uniquement la séquence codante pour la protéine—du codon de départ au codon stop—sans les régions non traduites 5’ et 3’ (UTRs) ni les introns.
Les clones ORF sont largement utilisés pour :
- Expression protéique : Génération de protéines recombinantes dans des systèmes bactériens, de levures ou de mammifères.
- Études fonctionnelles : Investigation des interactions protéiques, des voies de signalisation et des mécanismes cellulaires.
- Dépistage à haut débit : Évaluation systématique de la fonction des protéines, des cibles médicamenteuses ou des librairies géniques.
- Génie génétique : Modifications personnalisées, marquages ou constructions de fusion pour la recherche et les applications biotechnologiques.
