Les anticorps primaires anti-cobaye conjugués au PerCP associent la spécificité des anticorps dirigés contre les immunoglobulines de cobaye au fluorophore naturel Peridinin Chlorophyll Protein Complex (PerCP). Initialement isolé à partir de dinoflagellés photosynthétiques, le PerCP se caractérise par une forte excitation autour de 482 nm et une émission intense dans le rouge lointain, aux environs de 675 nm. Il est ainsi particulièrement adapté aux applications de fluorescence multicolore utilisant des cytomètres en flux équipés d'un laser standard à 488 nm.
Caractéristiques du conjugué et spécificité
Les anticorps anti-cobaye conjugués au PerCP sont généralement des anticorps polyclonaux purifiés par chromatographie d'affinité, produits chez la chèvre ou le lapin. La plupart des préparations reconnaissent à la fois les chaînes lourdes et légères (H+L) des IgG de cobaye, tandis que des formulations spécifiques du fragment Fc sont également disponibles afin d'éliminer la liaison aux fragments F(ab')₂. Une conjugaison optimisée préserve à la fois la spécificité de l'anticorps et les propriétés fluorescentes du PerCP, garantissant une intensité de signal fiable tout en limitant l'encombrement stérique et les interactions non spécifiques.
Applications
- Cytométrie en flux : Principalement utilisés comme réactifs de détection secondaire pour l'immunophénotypage et les analyses multiparamétriques par cytométrie en flux. Le PerCP est efficacement excité par le laser de 488 nm et émet dans le rouge lointain, offrant une excellente séparation spectrale avec des fluorophores tels que le FITC et le PE.
- Essais de fluorescence multiplex : Adaptés aux applications d'immunofluorescence, où leur émission à grande longueur d'onde permet la détection simultanée de plusieurs cibles tout en réduisant le chevauchement spectral.
