Le chloroforme est un solvant non polaire classique en biochimie, indispensable pour l’extraction des lipides et les séparations de phases en raison de sa densité élevée et de sa solubilité sélective pour les biomolécules amphipathiques.
Propriétés chimiques
Le chloroforme (CHCl₃) possède un carbone tétraédrique lié à trois atomes de chlore et à un atome d’hydrogène, formant un liquide dense et incolore d’une densité d’environ 1,49 g/mL à 25°C. Son point d’ébullition est de 61,2°C et son point de fusion de −63,5°C. Le chloroforme présente une faible solubilité dans l’eau (environ 8 g/L) mais est miscible avec plusieurs solvants organiques tels que le méthanol et l’hexane. Son moment dipolaire (1,04 D) permet des interactions accepteurs de liaisons hydrogène. Ce solvant est fortement volatil, avec une pression de vapeur d’environ 197 mmHg à 25°C. Les qualités stabilisées contenant de l’éthanol ou des amylenes sont couramment utilisées pour inhiber la formation de phosgène sous l’effet de la lumière et de l’oxygène.
Applications en biochimie
En biochimie des lipides, le chloroforme est un solvant clé dans la méthode d’extraction de Folch (généralement avec un rapport chloroforme:méthanol de 2:1), permettant la partition des phospholipides et des glycolipides dans la phase organique inférieure pour des analyses ultérieures telles que la chromatographie sur couche mince (CCM), la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS) ou la résonance magnétique nucléaire (RMN) pour l’analyse des acides gras et des gangliosides. Il est également utilisé pour l’extraction des protéines membranaires ou des particules virales à partir de lysats aqueux. En biologie moléculaire, le chloroforme est employé dans la purification phénol–chloroforme des acides nucléiques afin de dénaturer les protéines tout en préservant l’intégrité structurale de l’ADN et de l’ARN. Par ailleurs, des étapes de lavage au chloroforme sont appliquées en analyse des glucides pour éliminer les contaminants lipophiles résiduels après hydrolyse, améliorant ainsi la pureté des échantillons pour la chromatographie liquide à haute performance (HPLC).