Les histones acétylées sont des protéines histones recombinantes ou modifiées chimiquement/enzymatiquement portant une acétylation sur un ou plusieurs résidus lysine définis (par exemple H3K9ac, H3K14ac, H3K27ac, H4K5ac, H4K8ac, H4K16ac). Elles constituent des réactifs de haute précision pour la recherche en épigénétique, la biochimie de la chromatine, la validation d’anticorps, les essais enzymatiques, l’assemblage de la chromatine et les études structurales. Des états d’acétylation précisément définis permettent d’élucider les effets mécanistiques de l’acétylation des histones sur la structure des nucléosomes, la liaison des protéines lectrices (« readers »), l’activation transcriptionnelle et la régulation enzymatique.

Caractéristiques principales

• Acétylation spécifique à un site : Histones acétylées sur un seul site ou sur plusieurs sites avec une stœchiométrie de modification définie (par exemple H3K27ac monoacétylée ; H3K9acK14ac doublement acétylée).
• Multiples méthodes de production : Ligature chimique (ligation chimique native ou ligation de protéines exprimées), acétylation enzymatique par des histone acétyltransférases (HAT) ou incorporation, via un codon amber, d’analogues d’acétyl-lysine, selon le site de modification, le niveau de complexité et la nécessité de conserver une liaison native.
• Formats disponibles : Histones recombinantes individuelles, octamères d’histones préassemblés contenant des sous-unités acétylées, mononucléosomes, réseaux de nucléosomes présentant des profils d’acétylation définis, ainsi que des peptides de contrôle.
• Haute pureté et caractérisation approfondie : Une pureté généralement supérieure à 90–95 %, vérifiée par SDS-PAGE et HPLC, tandis que l’occupation des sites de modification et la masse moléculaire sont confirmées par LC-MS/MS.
• Options de personnalisation : Choix de l’espèce (humain, souris, poulet), de la variante d’histone (H3.1, H3.3), de combinaisons de modifications post-traductionnelles (acétylation associée à la méthylation et/ou à la phosphorylation), d’étiquettes d’affinité (His, FLAG, Avi) ainsi que de marqueurs fluorescents ou biochimiques pour les applications en aval.

Applications courantes

• Validation d’anticorps : Contrôles de référence (« gold standard ») pour évaluer la spécificité des anticorps dirigés contre les lysines acétylées lors de Western blots, dot blots, analyses sur réseaux de peptides et validations d’immunoprécipitation de chromatine (ChIP).
• Essais de liaison des domaines lecteurs : Étude des interactions impliquant les bromodomaines et d’autres protéines reconnaissant les lysines acétylées à l’aide de techniques biophysiques telles que la calorimétrie de titration isotherme (ITC), la résonance plasmonique de surface (SPR), la polarisation de fluorescence (FP) et les essais de criblage d’inhibiteurs.
• Essais d’activité enzymatique : Utilisation comme substrats ou contrôles dans les essais d’activité des histones désacétylases (HDAC) et des sirtuines, ainsi que dans les études d’activité et de cinétique des histone acétyltransférases (HAT).
• Reconstitution des nucléosomes : Évaluation de l’influence de l’acétylation spécifique à un site sur la stabilité des nucléosomes, l’accessibilité de la chromatine, le remodelage nucléosomique et l’organisation de la chromatine de haut ordre.
• Études de biologie structurale : Génération de nucléosomes homogènes et précisément modifiés pour la microscopie électronique cryogénique (cryo-EM), la cristallographie aux rayons X et l’analyse structurale des complexes associés à la chromatine.
• Développement de tests et criblage à haut débit : Utilisation comme substrats ou contrôles positifs et négatifs dans des campagnes de criblage visant à identifier des modulateurs épigénétiques et des composés ciblant la chromatine.
• Standards pour la spectrométrie de masse : Utilisation d’histones et de peptides acétylés comme étalons quantitatifs et matériaux de référence pour le développement et la validation de méthodes en protéomique.