Les kits de dosage de l'activité des ADN méthyltransférases (DNMT) offrent une méthode fiable et non radioactive pour mesurer l'activité des DNMT en suivant le transfert de groupes méthyle depuis la S-adénosylméthionine (SAM) vers des substrats d'ADN. Ces tests sont largement utilisés en recherche épigénétique, pour la caractérisation enzymatique, le criblage d'inhibiteurs, le contrôle qualité des protéines recombinantes ainsi que l'analyse de l'activité des DNMT dans des protéines purifiées ou des extraits nucléaires.
Formats de dosage
Les méthodes modernes de dosage des DNMT reposent sur une détection de type ELISA utilisant des anticorps anti-5-méthylcytosine, sur des systèmes enzymatiques couplés permettant la détection de la S-adénosylhomocystéine (SAH), ou sur des approches hautement quantitatives basées sur la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) ou la chromatographie liquide haute performance (HPLC). Les lectures colorimétriques, fluorométriques, chimioluminescentes et bioluminescentes constituent des alternatives sensibles et évolutives aux méthodes radiométriques traditionnelles.
Applications
- Recherche en épigénétique : Quantification de l'activité totale des DNMT ou de l'activité spécifique de chaque isoforme.
- Découverte de médicaments : Criblage à haut débit des inhibiteurs des DNMT et caractérisation des paramètres cinétiques enzymatiques.
- Contrôle qualité : Validation des enzymes DNMT recombinantes et comparaison de l'activité des DNMT cellulaires dans différentes conditions expérimentales.
