Sirtuine (SIRTs) sind eine Familie NAD⁺-abhängiger Deacetylasen und Deacylasen, die diverse zelluläre Prozesse wie Stoffwechsel, Alterung und Stressreaktionen regulieren. Die genaue Messung der SIRT-Enzymaktivität ist entscheidend, um ihre biologische Funktion zu verstehen und für die Wirkstoffforschung, die auf diese Enzyme abzielt. Verschiedene Assay-Kits wurden entwickelt, um SIRT-Aktivität oder Hemmung zu quantifizieren.

Anwendungen

• Quantifizierung der gesamten oder isoformspezifischen SIRT-Aktivität in nuklearen, zytoplasmatischen oder mitochondrialen Extrakten.
• Screening von kleinen Molekülen, die SIRT-Enzyme aktivieren oder hemmen, in der Wirkstoffforschung.
• Studium der Enzymkinetik und regulatorischen Mechanismen.
• Vergleich der SIRT-Aktivität in verschiedenen Geweben, Krankheitszuständen oder experimentellen Bedingungen.

Vorteile

• Empfindlichkeit und Spezifität: Moderne Kits erkennen Aktivität bereits in Nanogramm-Mengen des Enzyms mit minimalem Hintergrund.
• Flexibilität: Kompatibel mit gereinigten Enzymen und komplexen biologischen Proben.
• High-Throughput-Kompatibilität: Fluorometrische und lumineszente Assays eignen sich für Automatisierung.
• Reduzierte Interferenz: Einige Kits vermeiden trypsinbasierte Spaltungsschritte, wodurch Fehlalarme durch Kontaminationen reduziert werden.
• Quantitative Kontrollen: Die Einbeziehung von deacetylierten Histonstandards und bekannten Inhibitoren (z.B. Nicotinamid) ermöglicht Validierung und Quantifizierung des Assays.

SIRT-Assay-Kits liefern essentielle Werkzeuge, um das Verständnis der Sirtuin-Biologie voranzutreiben und für pharmakologische Screens. Die Vielfalt der Assay-Formate bietet Forschern Optionen, die auf ihre experimentellen Bedürfnisse zugeschnitten sind, unter Berücksichtigung von Empfindlichkeit, Durchsatz und Probenkompatibilität. Fortlaufende Verbesserungen bei Assay-Substraten und Nachweismethoden versprechen eine verbesserte Leistung und Kosteneffizienz für zukünftige Sirtuin-Forschung.