NeoPRO Atto Western ECL-Substrat

Das NeoPRO Atto Western ECL Substrat ist ein ultrasensitives, zweikomponentiges Chemilumineszenz-Substrat für Western-Blotting und HRP-basierte Proteindetektion. Es bietet eine extrem hohe Signalintensität für den Nachweis von Spurenmengen an Protein und eignet sich besonders für Ziele mit sehr geringer und extrem geringer Abundanz.

Das Substrat basiert auf einem Luminol-basierten Chemilumineszenz-Detektionssystem. Während der Detektion katalysiert Meerrettichperoxidase die Oxidation des Luminol-Derivats, wodurch Licht bei ca. 425 nm erzeugt wird. In die Formulierung eingearbeitete Verstärkerkomponenten erhöhen die Lichtemission und erzeugen sehr helle Proteinbanden innerhalb kurzer Belichtungszeiten.

Das NeoPRO Atto Western ECL Substrat wurde entwickelt, um die Detektion und Auswertung selbst schwächster Western-Blot-Banden zu verbessern. Seine sehr hohe Empfindlichkeit prädestiniert es für Experimente mit winzigen Proteinmengen, begrenzten Mengen an Zelllysat oder stark verdünnten Antikörpern, wodurch wertvolle Proben und kostspielige Primärantikörper geschont werden.

Das Produkt wird als Kit aus zwei Lösungen geliefert, das eine Luminol-Derivat-/Verstärkerlösung und eine Peroxidlösung enthält. Die beiden Komponenten werden unmittelbar vor der Anwendung im Verhältnis 1:1 gemischt, um die Arbeitslösung herzustellen.

• Ultrasensitives zweikomponentiges Chemilumineszenz-Substrat für Western-Blotting
• Entwickelt für den Nachweis von Spurenmengen an Protein
• Extrem hohe Chemilumineszenz-Signalintensität
• Geeignet für Proteinziele mit extrem geringer Abundanz
• Erzeugt sehr helle Banden innerhalb kurzer Belichtungszeiten
• Verbessert die Visualisierung und Auswertung schwacher Western-Blot-Banden
• Geeignet für begrenzte oder wertvolle biologische Proben
• Unterstützt die Verwendung stark verdünnter Primär- und Sekundärantikörper
• Kann den Verbrauch wertvoller Proben und teurer Antikörper reduzieren
• HRP-abhängige Chemilumineszenz-Detektion
• Luminol-Derivat-/Verstärkerlösung und Peroxidlösung separat geliefert
• Arbeitslösung wird durch Mischen der beiden Komponenten im Verhältnis 1:1 hergestellt
• Kompatibel mit HRP-konjugierten Sekundärantikörpern
• Kompatibel mit Nitrocellulose- und PVDF-Western-Blot-Membranen
• Geeignet für Chemilumineszenz-Bildgebungssysteme und Autoradiographie-Filme
• Empfohlene Verdünnung des Primärantikörpers: 1:10.000–1:200.000
• Empfohlene Verdünnung des Sekundärantikörpers: 1:300.000–1:1.000.000
• Nur für Forschungszwecke

1. Arbeitslösung vorbereiten: Mischen Sie gleiche Volumina von Lösung A und Lösung B unmittelbar vor der Verwendung im Verhältnis 1:1.
2. Kreuzkontamination vermeiden: Verwenden Sie für jede Stammlösung separate, saubere Pipettenspitzen. Bringen Sie Lösung A nicht in Lösung B und Lösung B nicht in Lösung A ein.
3. Membran vorbereiten: Nach der Inkubation mit dem Primärantikörper und dem HRP-konjugierten Sekundärantikörper die Membran gründlich mit TBS-T-Puffer waschen.
4. Vor der Detektion spülen: Nehmen Sie die Membran aus ihrer Schale, spülen Sie sie zweimal mit TBS-T und halten Sie sie feucht, bis das Substrat aufgetragen wird.
5. Überschüssigen Puffer entfernen: Lassen Sie überschüssigen Puffer von einer Ecke der Membran ablaufen, ohne dass die Membran austrocknet.
6. Substrat auftragen: Tragen Sie ca. 0,1 mL der vorbereiteten NeoPRO Atto Arbeitslösung pro cm² Membran auf.
7. Inkubieren: Platzieren Sie die Membran mit der Proteinseite nach oben und stellen Sie sicher, dass die Arbeitslösung die Membranoberfläche vollständig bedeckt. Etwa 1,5 Minuten inkubieren.
8. Signal erfassen: Detektieren Sie das Chemilumineszenz-Signal mit einem kompatiblen Bildgebungsgerät oder Autoradiographie-Film.
9. Mit einer kurzen Belichtung beginnen: Da NeoPRO Atto eine extrem hohe Lichtemission erzeugt, beginnen Sie mit einer kurzen Belichtungszeit und erhöhen Sie diese nur bei Bedarf.
10. Antikörperverdünnungen optimieren: Verdünnen Sie die Antikörper ausreichend, um ein spezifisches Signal zu erhalten und gleichzeitig Hintergrund, Sättigung und einen zu schnellen Substratverbrauch zu begrenzen.