NeoPRO Femto Western ECL-Substrat

Das NeoPRO Femto Western ECL Substrat ist ein zweikomponentiges chemilumineszierendes Substrat, das für das Western Blotting und den HRP-basierten Proteinnachweis entwickelt wurde. Es bietet ein Nachweisniveau im mittleren bis unteren Femtogramm-Bereich und eignet sich besonders für Anwendungen, die eine sehr hohe Empfindlichkeit und einen zuverlässigen Nachweis von Proteinzielen geringer Abundanz erfordern.

Das Substrat basiert auf einem Luminol-abgeleiteten chemilumineszierenden Nachweissystem. Während des Nachweises katalysiert Meerrettichperoxidase die Oxidation des Luminolderivats, wodurch Licht bei ca. 425 nm erzeugt wird. In die Formulierung integrierte Enhancerkomponenten erhöhen die Intensität und Dauer des chemilumineszierenden Signals.

Das NeoPRO Femto Western ECL Substrat erzeugt ein starkes chemilumineszierendes Signal bei sehr geringem Hintergrund, was ein hohes Signal-Rausch-Verhältnis ermöglicht. Seine verlängerte Signaldauer erleichtert wiederholte Bildaufnahmen und die Optimierung der Belichtungsbedingungen.

Das Produkt wird als Kit aus zwei Lösungen geliefert, das eine Luminolderivat-/Enhancer-Lösung und eine Peroxidlösung enthält. Die beiden Komponenten werden unmittelbar vor der Verwendung im Verhältnis 1:1 gemischt, um die Arbeitslösung herzustellen.

• Zweikomponentiges chemilumineszierendes Substrat für das Western Blotting
• Entwickelt für den Proteinnachweis im mittleren bis unteren Femtogramm-Bereich
• Sehr hohe Empfindlichkeit für Proteinziele geringer Abundanz
• Starkes chemilumineszierendes Signal mit sehr geringem Hintergrund
• Hohes Signal-Rausch-Verhältnis zur klaren Visualisierung schwach intensiver Banden
• Verlängerte chemilumineszierende Signaldauer
• HRP-abhängiger chemilumineszierender Nachweis
• Luminolderivat-/Enhancer- und Peroxidlösung separat geliefert
• Arbeitslösung wird durch Mischen der beiden Komponenten im Verhältnis 1:1 hergestellt
• Kompatibel mit HRP-konjugierten Sekundärantikörpern
• Kompatibel mit Nitrocellulose- und PVDF-Western-Blot-Membranen
• Geeignet für die Signalerfassung mittels Chemilumineszenz-Bildgebungssystemen oder Autoradiographie-Filmen
• Empfohlene Primärantikörper-Verdünnung: 1:5.000–1:50.000
• Empfohlene Sekundärantikörper-Verdünnung: 1:50.000–1:250.000
• Nur für Forschungszwecke

1. Arbeitslösung vorbereiten: Mischen Sie gleiche Volumina von Lösung A und Lösung B unmittelbar vor der Verwendung im Verhältnis 1:1.
2. Kreuzkontamination vermeiden: Verwenden Sie für jede Stammlösung separate, saubere Pipettenspitzen. Geben Sie weder Lösung A in Lösung B noch Lösung B in Lösung A.
3. Membran vorbereiten: Nach der Inkubation mit dem Primärantikörper und dem HRP-konjugierten Sekundärantikörper die Membran gründlich mit TBS-T-Puffer waschen.
4. Vor dem Nachweis spülen: Nehmen Sie die Membran aus der Waschschale, spülen Sie sie zweimal mit TBS-T und halten Sie sie feucht, bis das Substrat aufgetragen wird.
5. Überschüssigen Puffer entfernen: Lassen Sie überschüssigen Puffer von einer Ecke der Membran abtropfen, ohne dass die Membran austrocknet.
6. Substrat auftragen: Tragen Sie ca. 0,1 ml vorbereitete NeoPRO Femto Arbeitslösung pro cm² Membran auf.
7. Inkubieren: Platzieren Sie die Membran mit der Proteinseite nach oben und stellen Sie sicher, dass die Arbeitslösung die Membranoberfläche vollständig bedeckt. Ca. 1,5 Minuten inkubieren.
8. Signal erfassen: Detektieren Sie das chemilumineszierende Signal mit einem kompatiblen Bildgebungsgerät oder Autoradiographie-Film.
9. Belichtung optimieren: Wenn die zu erwartende Signalintensität unbekannt ist, können initiale Belichtungszeiten von 15 Sekunden, 30 Sekunden, 1 Minute und 5 Minuten getestet werden.
10. Antikörperverdünnungen optimieren: Passen Sie die Konzentrationen der Primär- und Sekundärantikörper bei Bedarf an, um ein starkes spezifisches Signal bei minimalem Hintergrund zu erhalten.