NeoPRO Pico Western ECL-Substrat

Das NeoPRO Pico Western ECL Substrat ist ein zweikomponentiges chemiolumineszierendes Substrat, das für Western blotting und HRP-basierte Proteindetektion entwickelt wurde. Es bietet einen Nachweisbereich im niedrigen Pikogramm-Bereich und eignet sich besonders für den Nachweis reichlich vorhandener Proteinziele in Routine-Western-Blot-Experimenten.

Das Substrat basiert auf einem von Luminol abgeleiteten chemiolumineszierenden Detektionssystem. Während der Detektion katalysiert Meerrettichperoxidase die Oxidation des Luminolderivats, wodurch Licht bei ca. 425 nm erzeugt wird. In die Formulierung eingearbeitete Verstärkungskomponenten erhöhen die Intensität und Dauer des chemilumineszierenden Signals.

Das NeoPRO Pico Western ECL Substrat wird als Kit aus zwei Lösungen geliefert, das eine Luminolderivat-/Verstärkerlösung und eine Peroxidlösung enthält. Die beiden Komponenten werden unmittelbar vor der Anwendung auf der Western-Blot-Membran im Verhältnis 1:1 gemischt.

Seine stabile Lichtausbeute und niedrige Pikogramm-Empfindlichkeit machen es geeignet für die Routinenalyse hoch exprimierter Proteine. Das Substrat kann mit standardmäßigen Western-Blot-Arbeitsabläufen verwendet werden, die SDS-PAGE, Membrantransfer, Blockierung, Inkubation mit dem Primärantikörper und den Nachweis mit HRP-konjugierten Sekundärantikörpern umfassen.

• Zweikomponentiges chemiolumineszierendes Substrat für Western blotting
• Entwickelt für den Proteinnachweis im niedrigen Pikogramm-Bereich
• Geeignet für reichlich vorhandene Proteinziele und Proben
• Bietet eine stabile chemilumineszierende Lichtausbeute
• HRP-abhängiger chemilumineszierender Nachweis
• Luminolderivat/Verstärker und Peroxidlösung separat geliefert
• Arbeitslösung hergestellt durch Mischen der beiden Komponenten im Verhältnis 1:1
• Geeignet für Routine-Western-Blot-Anwendungen
• Kompatibel mit HRP-konjugierten Sekundärantikörpern
• Kompatibel mit Nitrocellulose- und PVDF-Western-Blot-Membranen
• Geeignet für die Signalerfassung mit Chemilumineszenz-Bildgebungssystemen oder Autoradiographie-Filmen
• Empfohlene Verdünnung des Primärantikörpers: 1:500–1:5.000
• Empfohlene Verdünnung des Sekundärantikörpers: 1:20.000–1:100.000
• Nur für Forschungszwecke

1. Arbeitslösung vorbereiten: Mischen Sie gleiche Volumina von Lösung A und Lösung B im Verhältnis 1:1 unmittelbar vor der Verwendung. Bereiten Sie nur das für die Membran benötigte Volumen vor.
2. Kreuzkontamination vermeiden: Verwenden Sie für jede Stammlösung separate, saubere Pipettenspitzen. Führen Sie Lösung A nicht in Lösung B ein und umgekehrt.
3. Membran vorbereiten: Waschen Sie die Membran nach der Inkubation mit dem Primärantikörper und dem HRP-konjugierten Sekundärantikörper gründlich mit TBS-T-Puffer.
4. Vor dem Nachweis spülen: Nehmen Sie die Membran aus der Waschschale, spülen Sie sie zweimal mit TBS-T und halten Sie sie feucht, bis das Substrat aufgetragen wird.
5. Überschüssigen Puffer entfernen: Lassen Sie überschüssigen Puffer von einer Ecke der Membran abtropfen, ohne dass die Membran austrocknet.
6. Substrat auftragen: Tragen Sie etwa 0,1 mL der zubereiteten NeoPRO Pico Arbeitslösung pro cm² Membran auf.
7. Inkubieren: Platzieren Sie die Membran mit der Proteinseite nach oben und stellen Sie sicher, dass die Arbeitslösung die Membranoberfläche vollständig bedeckt. Inkubieren Sie für ca. 1,5 Minuten.
8. Signal erfassen: Detektieren Sie das chemilumineszierende Signal mithilfe eines kompatiblen Bildgebungsgeräts oder eines Autoradiographie-Films.
9. Belichtung optimieren: Wenn die erwartete Signalintensität unbekannt ist, können anfängliche Belichtungszeiten von 15 Sekunden, 30 Sekunden, 1 Minute und 5 Minuten getestet werden.
10. Antikörperverdünnungen optimieren: Passen Sie die Konzentrationen des Primär- und Sekundärantikörpers bei Bedarf an, um ein starkes spezifisches Signal bei minimalem Hintergrund zu erhalten.