Sustrato NeoPRO Atto Western ECL

El sustrato Western ECL NeoPRO Atto es un sustrato quimioluminiscente ultrasensible de dos componentes diseñado para Western blotting y detección de proteínas basada en HRP. Ofrece una intensidad de señal extremadamente alta para la detección de trazas de proteínas y es especialmente adecuado para dianas de muy baja y extremadamente baja abundancia.

El sustrato se basa en un sistema de detección quimioluminiscente derivado del luminol. Durante la detección, la peroxidasa de rábano cataliza la oxidación del derivado de luminol, produciendo luz a aproximadamente 425 nm. Los componentes potenciadores incorporados en la formulación aumentan la emisión de luz, generando bandas de proteínas muy brillantes en tiempos de exposición cortos.

El sustrato Western ECL NeoPRO Atto está diseñado para mejorar la detección y la interpretación de las bandas de Western blot más débiles. Su altísima sensibilidad lo hace adecuado para experimentos con cantidades diminutas de proteínas, cantidades limitadas de lisado celular o anticuerpos altamente diluidos, lo que ayuda a preservar muestras valiosas y costosos anticuerpos primarios.

El producto se suministra como un kit de dos soluciones que contiene una solución de derivado de luminol/potenciador y una solución de peróxido. Los dos componentes se mezclan en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso para preparar la solución de trabajo.

• Sustrato quimioluminiscente ultrasensible de dos componentes para Western blotting
• Diseñado para la detección de trazas de proteínas
• Intensidad de señal quimioluminiscente extremadamente alta
• Adecuado para dianas proteicas de extremadamente baja abundancia
• Produce bandas muy brillantes en tiempos de exposición cortos
• Mejora la visualización y la interpretación de las bandas débiles de Western blot
• Adecuado para muestras biológicas limitadas o valiosas
• Permite el uso de anticuerpos primarios y secundario altamente diluidos
• Puede reducir el consumo de muestras valiosas y anticuerpos caros
• Detección quimioluminiscente dependiente de HRP
• Solución de derivado de luminol/potenciador y solución de peróxido suministradas por separado
• Solución de trabajo preparada mezclando los dos componentes en una proporción de 1:1
• Compatible con anticuerpos secundarios conjugados con HRP
• Compatible con membranas de nitrocelulosa y PVDF para Western blot
• Adecuado para sistemas de imagen de quimioluminiscencia y películas de autorradiografía
• Dilución recomendada del anticorpo primario: 1:10.000–1:200.000
• Dilución recomendada del anticorpo secundario: 1:300.000–1:1.000.000
• Solo para uso en investigación

1. Preparar la solución de trabajo: Mezclar volúmenes iguales de Solución A y Solución B en una proporción de 1:1 inmediatamente antes de su uso.
2. Evitar la contaminación cruzada: Utilizar puntas de pipeta limpias y separadas para cada solución madre. No introducir la Solución A en la Solución B ni la Solución B en la Solución A.
3. Preparar la membrana: Tras la incubación con el anticorpo primario y el anticorpo secundario conjugado con HRP, lavar la membrana minuciosamente con tampón TBS-T.
4. Enjuagar antes de la detección: Retirar la membrana de su bandeja, enjuagarla dos veces con TBS-T y mantenerla húmeda hasta que se aplique el sustrato.
5. Eliminar el exceso de tampón: Permitir que el exceso de tampón escurra desde una esquina de la membrana, sin permitir que esta se seque.
6. Aplicar el sustrato: Aplicar aproximadamente 0,1 mL de la solución de trabajo NeoPRO Atto preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Colocar la membrana con el lado de las proteínas hacia arriba y asegurarse de que la solución de trabajo cubra completamente la superficie de la membrana. Incubar durante aproximadamente 1,5 minutos.
8. Adquirir la señal: Detectar la señal quimioluminiscente utilizando un dispositivo de imagen compatible o una película de autorradiografía.
9. Comenzar con una exposición corta: Dado que NeoPRO Atto produce una emisión de luz extremadamente alta, comience con un tiempo de exposición corto y auméntelo solo cuando sea necesario.
10. Optimizar las diluciones de los anticuerpos: Diluir los anticuerpos de forma suficiente para obtener una señal específica limitando al mismo tiempo el fondo, la saturación y el agotamiento rápido del sustrato.