Le NeoPRO Femto PLUS Western ECL Substrate est un substrat chimiluminescent à deux composants, conçu pour le Western blot et la détection de protéines basée sur la peroxydase de raifort (HRP). Il offre un niveau de détection de l'ordre du femtogramme faible et est particulièrement adapté à la détection de très faibles quantités de protéines et de cibles faiblement exprimées.

Ce substrat repose sur un système de détection chimiluminescent dérivé du luminol. Lors de la détection, la peroxydase de raifort catalyse l'oxydation du dérivé de luminol, produisant une émission lumineuse d'environ 425 nm. Des composants amplificateurs intégrés à la formulation augmentent l'intensité du signal chimiluminescent.

Le NeoPRO Femto PLUS Western ECL Substrate associe une sensibilité ultra-élevée à une excellente intensité de signal et à une large plage dynamique linéaire. Ceci permet une analyse quantitative par Western blot tout en autorisant l'utilisation d'anticorps fortement dilués et en réduisant la consommation de réactifs précieux.

Le produit est fourni sous la forme d'un kit à deux solutions contenant une solution de dérivé de luminol/amplificateur et une solution de peroxyde. Les deux composants sont mélangés selon un rapport 1 : 1 immédiatement avant utilisation afin de préparer la solution de travail.

• Substrat chimiluminescent à deux composants pour le Western blot
• Conçu pour la détection de protéines au niveau du femtogramme faible
• Sensibilité ultra-élevée pour les protéines cibles très faiblement exprimées
• Excellente intensité de signal chimiluminescent
• Adapté à la détection de très faibles quantités de protéines
• Large plage dynamique linéaire pour l'analyse quantitative par Western blot
• Permet l'utilisation d'anticorps fortement dilués
• Peut réduire la consommation d'anticorps primaires et secondaires précieux
• Détection chimiluminescente dépendante de la HRP
• Solutions de dérivé de luminol/amplificateur et de peroxyde fournies séparément
• Solution de travail préparée par mélange des deux composants selon un rapport 1 : 1
• Compatible avec les anticorps secondaires conjugués à la HRP
• Compatible avec les membranes de Western blot en nitrocellulose et en PVDF
• Adapté aux systèmes d'imagerie par chimiluminescence et aux films d'autoradiographie
• Dilution recommandée de l'anticorps primaire : 1 : 5 000 à 1 : 100 000
• Dilution recommandée de l'anticorps secondaire : 1 : 100 000 à 1 : 500 000
• Réservé à un usage de recherche uniquement

1. Préparer la solution de travail : Mélanger des volumes égaux de la Solution A et de la Solution B selon un rapport 1 : 1 immédiatement avant utilisation.
2. Éviter la contamination croisée : Utiliser des embouts de pipette propres et séparés pour chaque solution mère. Ne pas introduire la Solution A dans la Solution B ni la Solution B dans la Solution A.
3. Préparer la membrane : Après l'incubation des anticorps primaire et secondaire conjugué à la HRP, laver la membrane abondamment avec du tampon TBS-T.
4. Rincer avant la détection : Retirer la membrane de son bac, la rincer deux fois avec du TBS-T et la maintenir humide jusqu'à l'application du substrat.
5. Éliminer l'excès de tampon : Laisser l'excès de tampon s'écouler par un coin de la membrane sans laisser celle-ci sécher.
6. Appliquer le substrat : Appliquer environ 0,1 mL de solution de travail NeoPRO Femto PLUS préparée par cm² de membrane.
7. Incubation : Placer la membrane face protéique vers le haut et s'assurer que la solution de travail recouvre complètement la surface de la membrane. Incuber pendant environ 1,5 minute.
8. Acquérir le signal : Détecter le signal chimiluminescent à l'aide d'un système d'imagerie compatible ou d'un film d'autoradiographie.
9. Optimiser le temps d'exposition : Lorsque l'intensité attendue du signal est inconnue, des temps d'exposition initiaux de 15 secondes, 30 secondes, 1 minute et 5 minutes peuvent être testés.
10. Optimiser les dilutions d'anticorps : En raison de la sensibilité ultra-élevée du substrat, diluer suffisamment les anticorps pour obtenir un signal spécifique tout en limitant le bruit de fond et la saturation.

NeoPRO Femto PLUS Western ECL Substrate