Le NeoPRO Femto Western ECL Substrate est un substrat chimiluminescent à deux composants, conçu pour le Western blot et la détection de protéines basée sur la peroxydase de raifort (HRP). Il offre un niveau de détection de l'ordre du femtogramme intermédiaire à faible et est particulièrement adapté aux applications nécessitant une très haute sensibilité et une détection fiable de protéines cibles faiblement exprimées.

Ce substrat repose sur un système de détection chimiluminescent dérivé du luminol. Lors de la détection, la peroxydase de raifort catalyse l'oxydation du dérivé de luminol, produisant une émission lumineuse d'environ 425 nm. Des composants amplificateurs intégrés à la formulation augmentent l'intensité et la durée du signal chimiluminescent.

Le NeoPRO Femto Western ECL Substrate génère un signal chimiluminescent intense en présence d'un niveau de bruit de fond très faible, offrant ainsi un rapport signal sur bruit élevé. Sa durée de signal prolongée facilite les acquisitions d'images répétées et l'optimisation des conditions d'exposition.

Le produit est fourni sous la forme d'un kit à deux solutions contenant une solution de dérivé de luminol/amplificateur et une solution de peroxyde. Les deux composants sont mélangés selon un rapport 1 : 1 immédiatement avant utilisation afin de préparer la solution de travail.

• Substrat chimiluminescent à deux composants pour le Western blot
• Conçu pour la détection de protéines au niveau du femtogramme intermédiaire à faible
• Très haute sensibilité pour les protéines cibles faiblement exprimées
• Signal chimiluminescent intense avec un niveau de bruit de fond très faible
• Rapport signal sur bruit élevé pour une visualisation claire des bandes de faible intensité
• Durée de signal chimiluminescent prolongée
• Détection chimiluminescente dépendante de la HRP
• Solutions de dérivé de luminol/amplificateur et de peroxyde fournies séparément
• Solution de travail préparée par mélange des deux composants selon un rapport 1 : 1
• Compatible avec les anticorps secondaires conjugués à la HRP
• Compatible avec les membranes de Western blot en nitrocellulose et en PVDF
• Adapté à l'acquisition du signal à l'aide de systèmes d'imagerie par chimiluminescence ou de films d'autoradiographie
• Dilution recommandée de l'anticorps primaire : 1 : 5 000 à 1 : 50 000
• Dilution recommandée de l'anticorps secondaire : 1 : 50 000 à 1 : 250 000
• Réservé à un usage de recherche uniquement

1. Préparer la solution de travail : Mélanger des volumes égaux de la Solution A et de la Solution B selon un rapport 1 : 1 immédiatement avant utilisation.
2. Éviter la contamination croisée : Utiliser des embouts de pipette propres et séparés pour chaque solution mère. Ne pas introduire la Solution A dans la Solution B ni la Solution B dans la Solution A.
3. Préparer la membrane : Après l'incubation des anticorps primaire et secondaire conjugué à la HRP, laver la membrane abondamment avec du tampon TBS-T.
4. Rincer avant la détection : Retirer la membrane du bac de lavage, la rincer deux fois avec du TBS-T et la maintenir humide jusqu'à l'application du substrat.
5. Éliminer l'excès de tampon : Laisser l'excès de tampon s'écouler par un coin de la membrane sans laisser celle-ci sécher.
6. Appliquer le substrat : Appliquer environ 0,1 mL de solution de travail NeoPRO Femto préparée par cm² de membrane.
7. Incubation : Placer la membrane face protéique vers le haut et s'assurer que la solution de travail recouvre complètement la surface de la membrane. Incuber pendant environ 1,5 minute.
8. Acquérir le signal : Détecter le signal chimiluminescent à l'aide d'un système d'imagerie compatible ou d'un film d'autoradiographie.
9. Optimiser le temps d'exposition : Lorsque l'intensité attendue du signal est inconnue, des temps d'exposition initiaux de 15 secondes, 30 secondes, 1 minute et 5 minutes peuvent être testés.
10. Optimiser les dilutions d'anticorps : Ajuster les concentrations des anticorps primaire et secondaire si nécessaire pour obtenir un signal spécifique fort avec un bruit de fond minimal.