Cloroformio è un classico solvente apolare in biochimica, indispensabile per l’estrazione di lipidi e la separazione di fasi grazie alla sua densità e solubilità selettiva per biomolecole anfiipatiche.

Proprietà chimiche

Il cloroformio (CHCl₃) presenta un carbonio tetraedrico legato a tre atomi di cloro e un atomo di idrogeno, formando un liquido denso e incolore con una densità di circa 1,49 g/mL a 25 °C. Ha un punto di ebollizione di 61,2 °C e un punto di fusione di –63,5 °C. Il cloroformio mostra bassa solubilità in acqua (circa 8 g/L), ma è miscibile con molti solventi organici come metanolo ed esano. Il suo momento dipolare (1,04 D) consente interazioni di accettazione di legami a idrogeno. Il solvente è altamente volatile, con una pressione di vapore di circa 197 mmHg a 25 °C. Le qualità stabilizzate contenenti etanolo o amileni sono comunemente utilizzate per inibire la formazione di fosgene sotto esposizione alla luce e all’ossigeno.

Applicazioni biochimiche

Nella biochimica dei lipidi, il cloroformio è un solvente chiave nel metodo di estrazione Folch (solitamente in rapporto 2:1 cloroformio:metanolo), che consente la partizione di fosfolipidi e glicolipidi nella fase organica inferiore per tecniche analitiche successive come cromatografia su strato sottile (TLC), cromatografia gas-liquido-spettrometria di massa (GC-MS) o analisi mediante risonanza magnetica nucleare (NMR) di acidi grassi e gangliosidi. È anche utilizzato per l’estrazione di proteine di membrana o particelle virali da lisati acquosi. Nei flussi di lavoro di biologia molecolare, il cloroformio è impiegato nella purificazione di acidi nucleici con fenolo-cloroformio per denaturare le proteine mantenendo l’integrità strutturale di DNA e RNA. Inoltre, passaggi di lavaggio con cloroformio sono applicati nell’analisi dei carboidrati per rimuovere contaminanti lipofili residui dopo idrolisi, migliorando la purezza del campione per cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC).