Cromatografia di Affinità si basa sul legame specifico e reversibile di una proteina con un ligando legato alla matrice, che viene quindi definito resina di affinità. Il ligando può legarsi direttamente alla proteina di interesse o a un tag legato covalentemente alla proteina (istidina, GST ...). La cromatografia di affinità è spesso la procedura di purificazione più robusta e viene generalmente utilizzata nelle prime fasi del processo di purificazione. A seconda dell'applicazione successiva, la purificazione di affinità può essere l'unico passaggio cromatografico necessario per ottenere la purezza adeguata.
Le proteine possono essere purificate mediante cromatografia di affinità in modo selettivo o non selettivo. Nella cromatografia di affinità selettiva, si utilizza un ligando specifico per una proteina covalentemente legata o un tag. Nella cromatografia di affinità non selettiva, come Protein A, G, L per le immunoglobuline, o eparina per le proteine leganti il DNA, o lectina per le glicoproteine, il ligando si lega a un gruppo di proteine con capacità di legame simili.
Resine disponibili:
- Nickel-NTA: per la purificazione di proteine etichettate con polihistidina
- Cobalt-NTA: per la purificazione di proteine etichettate con polihistidina
- GST: per la purificazione di proteine etichettate con GST
- Protein A: per la purificazione di anticorpi
- Protein G: per la purificazione di anticorpi
