Membrane di nitrocellulosa sono membrane porose costituite da nitrocellulosa (o, in alcune formulazioni commerciali, da una matrice di esteri misti della cellulosa), utilizzate come supporto solido per l'immobilizzazione di proteine, glicoproteine e acidi nucleici. Introdotta per la prima volta per il protein blotting nel 1967, la nitrocellulosa rimane oggi una delle matrici di blotting più ampiamente utilizzate.
Proprietà e meccanismo di legame
Il legame delle proteine alla nitrocellulosa avviene principalmente attraverso una combinazione di interazioni idrofobiche ed elettrostatiche. Questo legame è descritto come istantaneo e quasi irreversibile, con una capacità quantitativa generalmente riportata di 80–100 µg/cm². Come esempio commerciale, la membrana Immobilon-NC di Merck, basata su una matrice di esteri misti della cellulosa, è disponibile in un formato idrofilo con una dimensione dei pori di 0,45 µm e presenta capacità di adsorbimento documentate di circa 117 µg/cm² per l'insulina, 160 µg/cm² per la BSA e 259 µg/cm² per le IgG di capra. La nitrocellulosa viene facilmente bagnata con acqua o tampone di trasferimento ed è compatibile con metodi di rilevazione colorimetrici, chemiluminescenti e con la maggior parte dei metodi di rilevazione fluorescenti. Un limite riconosciuto è che la nitrocellulosa non supportata è intrinsecamente fragile; i formati di nitrocellulosa supportata, costruiti su una struttura di supporto inerte, offrono una maggiore resistenza meccanica e possono sopportare il reprobing e la sterilizzazione in autoclave a 121 °C. La nitrocellulosa è inoltre solubile in solventi organici come metanolo e acetone, pertanto l'esposizione a tali solventi deve essere limitata per preservare l'integrità della membrana.
Applicazioni
Le membrane di nitrocellulosa sono utilizzate come supporto solido nelle tecniche di blotting per proteine e acidi nucleici, tra cui western blot, northern blot e Southern blot, nonché nelle procedure di colony lift e plaque lift. In particolare, nel western blot sono apprezzate per l'elevata affinità di legame verso proteine di peso molecolare basso o medio, il ridotto rumore di fondo e la compatibilità con molteplici metodi di rilevazione, generalmente a un costo relativamente contenuto. Rispetto alle membrane in PVDF, le membrane di nitrocellulosa sono spesso considerate in grado di fornire un migliore rapporto segnale/rumore nelle analisi in fluorescenza, mentre le membrane in PVDF tendono a produrre segnali chemiluminescenti più intensi e una maggiore sensibilità per le proteine presenti in basse concentrazioni. La nitrocellulosa è generalmente considerata meno adatta alle applicazioni di trasferimento degli acidi nucleici, come il blotting dell'RNA, poiché le condizioni ad alta concentrazione salina che favoriscono il legame delle proteine possono interferire con le interazioni basate sulla carica necessarie per la ritenzione degli acidi nucleici.
