Sirtuine (SIRTs) sono una famiglia di deacetilasi e deacilasi dipendenti da NAD⁺ che regolano diversi processi cellulari, tra cui metabolismo, invecchiamento e risposte allo stress. La misurazione accurata dell'attività enzimatica delle SIRT è essenziale per comprendere il loro ruolo biologico e per la scoperta di farmaci mirati a questi enzimi. Sono stati sviluppati diversi kit di saggio per quantificare l'attività o l'inibizione delle SIRT.

Applicazioni

• Quantificazione dell'attività totale o isoforma-specifica delle SIRT in estratti nucleari, citoplasmatici o mitocondriali.
• Screening di piccole molecole attivatrici o inibitorie delle SIRT nella scoperta di farmaci.
• Studio della cinetica enzimatica e dei meccanismi regolatori.
• Confronto dell'attività delle SIRT in diversi tessuti, stati patologici o condizioni sperimentali.

Vantaggi

• Sensibilità e Specificità: I kit moderni rilevano l'attività a partire da quantità nanogrammo dell'enzima con minimo rumore di fondo.
• Flessibilità: Compatibile con enzimi purificati e campioni biologici complessi.
• Compatibilità ad alto rendimento: I saggi fluorometrici e luminescenti sono adatti all'automazione.
• Interferenza ridotta: Alcuni kit evitano passaggi di clivaggio basati su tripsina, riducendo falsi segnali da contaminanti.
• Controlli quantitativi: L'inclusione di standard di istoni deacetilati e inibitori noti (es. nicotinamide) consente la validazione e quantificazione del saggio.

I kit di saggio SIRT forniscono strumenti essenziali per avanzare nella comprensione della biologia delle sirtuine e per lo screening farmacologico. La diversità dei formati di saggio offre ai ricercatori opzioni adattate alle loro esigenze sperimentali, bilanciando sensibilità, produttività e compatibilità con il tipo di campione. I continui miglioramenti nei substrati e nei metodi di rilevazione promettono prestazioni migliori e maggiore efficienza dei costi per le future ricerche sulle sirtuine.