Substrato NeoPRO Femto PLUS Western ECL

Il substrato Western ECL NeoPRO Femto PLUS è un substrato chemioluminescente a due componenti progettato per il Western blotting e la rilevazione di proteine basata su HRP. Fornisce un livello di rilevazione a bassi femtogrammi ed è particolarmente adatto per rilevare quantità molto ridotte di proteine e bersagli a bassa abbondanza.

Il substrato si basa su un sistema di rilevazione chemioluminescente derivato dal luminol. Durante la rilevazione, la perossidasi di rafano catalizza l'ossidazione del derivato del luminol, producendo luce a circa 425 nm. I componenti potenziatori incorporati nella formulazione aumentano l'intensità del segnale chemioluminescente.

Il substrato Western ECL NeoPRO Femto PLUS combina un'altissima sensibilità con un'eccellente intensità di segnale e un ampio intervallo dinamico lineare. Questo supporta l'analisi quantitativa del Western blot consentendo al contempo l'uso di anticorpi altamente diluiti e un ridotto consumo di reagenti preziosi.

Il prodotto viene fornito come un kit a due soluzioni contenente una soluzione di derivato di luminol/potenziatore e una soluzione di perossido. I due componenti vengono miscelati in rapporto 1:1 immediatamente prima dell'uso per preparare la soluzione di lavoro.

• Substrato chemioluminescente a due componenti per Western blotting
• Progettato per la rilevazione di proteine a bassi femtogrammi
• Sensibilità altissima per bersagli proteici a bassissima abbondanza
• Eccellente intensità del segnale chemioluminescente
• Adatto per la rilevazione di quantità di proteine molto ridotte
• Ampio intervallo dinamico lineare per l'analisi quantitativa del Western blot
• Supporta l'uso di anticorpi altamente diluiti
• Può ridurre il consumo di preziosi anticorpi primari e secondari
• Rilevazione chemioluminescente dipendente da HRP
• Soluzione di derivato di luminol/potenziatore e soluzione di perossido fornite separatamente
• Soluzione di lavoro preparata miscelando i due componenti in rapporto 1:1
• Compatibile con anticorpi secondari coniugati a HRP
• Compatibile con membrane per Western blot in nitrocellulosa e PVDF
• Adatto per sistemi di imaging per chemioluminescenza e pellicole per autoradiografia
• Diluizione dell'anticorpo primario raccomandata: 1:5.000–1:100.000
• Diluizione dell'anticorpo secondario raccomandata: 1:100.000–1:500.000
• Solo per uso di ricerca

1. Preparare la soluzione di lavoro: Miscelare volumi uguali di Soluzione A e Soluzione B in rapporto 1:1 immediatamente prima dell'uso.
2. Evitare la contaminazione crociata: Utilizzare puntali per pipette separati e puliti per ciascuna soluzione stock. Non introdurre la Soluzione A nella Soluzione B o la Soluzione B nella Soluzione A.
3. Preparare la membrana: Dopo l'incubazione con l'anticorpo primario e secondario coniugato a HRP, lavare accuratamente la membrana con tampone TBS-T.
4. Risciacquare prima della rilevazione: Rimuovere la membrana dal vassoio, risciacquarla due volte con TBS-T e mantenerla bagnata fino all'applicazione del substrato.
5. Rimuovere il tampone in eccesso: Lasciare scolare il tampone in eccesso da un angolo della membrana senza permettere alla membrana di asciugarsi.
6. Applicare il substrato: Applicare circa 0,1 mL della soluzione di lavoro NeoPRO Femto PLUS preparata per cm² di membrana.
7. Incubare: Posizionare la membrana con il lato delle proteine rivolto verso l'alto e assicurarsi che la soluzione di lavoro copra completamente la superficie della membrana. Incubare per circa 1,5 minuti.
8. Acquisire il segnale: Rilevare il segnale chemioluminescente utilizzando un dispositivo di imaging compatibile o una pellicola per autoradiografia.
9. Ottimizzare l'esposizione: Quando l'intensità del segnale attesa è sconosciuta, è possibile testare tempi di esposizione iniziali di 15 secondi, 30 secondi, 1 minuto e 5 minuti.
10. Ottimizzare le diluizioni degli anticorpi: A causa dell'altissima sensibilità del substrato, diluire gli anticorpi a un livello sufficiente per ottenere un segnale specifico limitando al contempo il fondo e la saturazione.