Substrato NeoPRO Atto Western ECL

Il substrato Western ECL NeoPRO Atto è un substrato chemioluminescente ultrasensibile a due componenti, progettato per il Western blotting e la rilevazione di proteine basata su HRP. Offre un'intensità di segnale estremamente elevata per la rilevazione di quantità in tracce di proteine ed è particolarmente adatto per bersagli a bassissima e ultrabassa abbondanza.

Il substrato si basa su un sistema di rilevazione chemioluminescente derivato dal luminol. Durante la rilevazione, la perossidasi di rafano catalizza l'ossidazione del derivato del luminol, producendo luce a circa 425 nm. I componenti potenziatori incorporati nella formulazione aumentano l'emissione di luce, generando bande proteiche molto luminose in tempi di esposizione brevi.

Il substrato Western ECL NeoPRO Atto è progettato per migliorare la rilevazione e l'interpretazione delle bande di Western blot più deboli. La sua altissima sensibilità lo rende adatto per esperimenti che coinvolgono quantità minime di proteine, quantità limitate di lisato cellulare o anticorpi altamente diluiti, aiutando a preservare campioni preziosi e costosi anticorpi primari.

Il prodotto viene fornito come un kit a due soluzioni contenente una soluzione di derivato di luminol/potenziatore e una soluzione di perossido. I due componenti vengono miscelati in rapporto 1:1 immediatamente prima dell'uso per preparare la soluzione di lavoro.

• Substrato chemioluminescente ultrasensibile a due componenti per Western blotting
• Progettato per la rilevazione di quantità in tracce di proteine
• Intensità del segnale chemioluminescente estremamente elevata
• Adatto per bersagli proteici a bassissima abbondanza
• Produce bande molto luminose in tempi di esposizione brevi
• Migliora la visualizzazione e l'interpretazione delle bande deboli di Western blot
• Adatto per campioni biologici limitati o preziosi
• Supporta l'uso di anticorpi primari e secondari altamente diluiti
• Può ridurre il consumo di campioni preziosi e anticorpi costosi
• Rilevazione chemioluminescente dipendente da HRP
• Soluzione di derivato di luminol/potenziatore e soluzione di perossido fornite separatamente
• Soluzione di lavoro preparata miscelando i due componenti in rapporto 1:1
• Compatibile con anticorpi secondari coniugati a HRP
• Compatibile con membrane per Western blot in nitrocellulosa e PVDF
• Adatto per sistemi di imaging per chemioluminescenza e pellicole per autoradiografia
• Diluizione dell'anticorpo primario raccomandata: 1:10.000–1:200.000
• Diluizione dell'anticorpo secondario raccomandata: 1:300.000–1:1.000.000
• Solo per uso di ricerca

1. Preparare la soluzione di lavoro: Miscelare volumi uguali di Soluzione A e Soluzione B in rapporto 1:1 immediatamente prima dell'uso.
2. Evitare la contaminazione crociata: Utilizzare puntali per pipette separati e puliti per ciascuna soluzione stock. Non introdurre la Soluzione A nella Soluzione B o la Soluzione B nella Soluzione A.
3. Preparare la membrana: Dopo l'incubazione con l'anticorpo primario e secondario coniugato a HRP, lavare accuratamente la membrana con tampone TBS-T.
4. Risciacquare prima della rilevazione: Rimuovere la membrana dal vassoio, risciacquarla due volte con TBS-T e mantenerla bagnata fino all'applicazione del substrato.
5. Rimuovere il tampone in eccesso: Lasciare scolare il tampone in eccesso da un angolo della membrana senza permettere alla membrana di asciugarsi.
6. Applicare il substrato: Applicare circa 0,1 mL della soluzione di lavoro NeoPRO Atto preparata per cm² di membrana.
7. Incubare: Posizionare la membrana con il lato delle proteine rivolto verso l'alto e assicurarsi che la soluzione di lavoro copra completamente la superficie della membrana. Incubare per circa 1,5 minuti.
8. Acquisire il segnale: Rilevare il segnale chemioluminescente utilizzando un dispositivo di imaging compatibile o una pellicola per autoradiografia.
9. Iniziare con un'esposizione breve: Poiché NeoPRO Atto produce un'emissione di luce estremamente elevata, iniziare con un tempo di esposizione breve e aumentarlo solo se necessario.
10. Ottimizzare le diluizioni degli anticorpi: Diluire gli anticorpi a un livello sufficiente per ottenere un segnale specifico limitando al contempo il fondo, la saturazione e il rapido esaurimento del substrato.