Substrato NeoPRO Femto Western ECL

Il Substrato ECL Western NeoPRO Femto è un substrato chemiluminescente a due componenti progettato per il Western blotting e il rilevamento di proteine basato su HRP. Offre un livello di rilevamento nell'intervallo dei femtogrammi medi e bassi ed è particolarmente adatto per applicazioni che richiedono una sensibilità elevatissima e un rilevamento affidabile di bersagli proteici a bassa abbondanza.

Il substrato si basa su un sistema di rilevamento chemiluminescente derivato dal luminol. Durante il rilevamento, la perossidasi di rafano catalizza l'ossidazione del derivato del luminol, generando luce a circa 425 nm. I componenti potenziatori incorporati nella formulazione aumentano l'intensità e la durata del segnale chemiluminescente.

Il Substrato ECL Western NeoPRO Femto genera un forte segnale chemiluminescente in presenza di un livello di fondo bassissimo, garantendo un elevato rapporto segnale-rumore. La sua durata prolungata del segnale facilita l'acquisizione ripetuta di immagini e l'ottimizzazione delle condizioni di esposizione.

Il prodotto viene fornito come kit di due soluzioni contenente una soluzione di derivato di luminol/potenziatore e una soluzione di perossido. I due componenti vengono miscelati in un rapporto di 1:1 immediatamente prima dell'uso per preparare la soluzione di lavoro.

• Substrato chemiluminescente a due componenti per Western blotting
• Progettato per il rilevamento di proteine nell'intervallo dei femtogrammi medi e bassi
• Sensibilità elevatissima per bersagli proteici a bassa abbondanza
• Forte segnale chemiluminescente con un livello di fondo bassissimo
• Elevato rapporto segnale-rumore per una chiara visualizzazione di bande a bassa intensità
• Durata prolungata del segnale chemiluminescente
• Rilevamento chemiluminescente dipendente da HRP
• Soluzioni di derivato di luminol/potenziatore e perossido fornite separatamente
• Soluzione di lavoro preparata miscelando i due componenti in un rapporto di 1:1
• Compatibile con anticorpi secondari coniugati con HRP
• Compatibile con membrane per Western blot in nitrocellulosa e PVDF
• Adatto per l'acquisizione del segnale tramite sistemi di imaging in chemiluminescenza o pellicola per autoradiografia
• Diluizione consigliata dell'anticorpo primario: 1:5.000–1:50.000
• Diluizione consigliata dell'anticorpo secondario: 1:50.000–1:250.000
• Solo per uso di ricerca

1. Preparare la soluzione di lavoro: Miscelare volumi uguali di Soluzione A e Soluzione B in un rapporto di 1: 1 immediatamente prima dell'uso.
2. Evitare la contaminazione crociata: Utilizzare puntali per pipette puliti e separati per ciascuna soluzione madre. Non introdurre la Soluzione A nella Soluzione B o la Soluzione B nella Soluzione A.
3. Preparare la membrana: Dopo l'incubazione con l'anticorpo primario e l'anticorpo secondario coniugato con HRP, lavare accuratamente la membrana con tampone TBS-T.
4. Risciacquare prima del rilevamento: Rimuovere la membrana dalla vaschetta di lavagem, risciacquarla due volte con TBS-T e mantenerla bagnata fino all'applicazione del substrato.
5. Rimuovere il tampone in eccesso: Lasciare scolare il tampone in eccesso da un angolo della membrana senza permettere che la membrana si asciughi.
6. Applicare il substrato: Applicare circa 0,1 mL di soluzione di lavoro NeoPRO Femto preparata per cm² di membrana.
7. Incubare: Posizionare la membrana con il lato delle proteine rivolto verso l'alto e assicurarsi che la soluzione di lavoro copra completamente la superficie della membrana. Incubare per circa 1,5 minuti.
8. Acquisire il segnale: Rilevare il segnale chemiluminescente utilizzando un dispositivo di imaging compatibile o una pellicola per autoradiografia.
9. Ottimizzare l'esposizione: Quando l'intensità del segnale attesa è sconosciuta, è possibile testare tempi di esposizione iniziali di 15 secondi, 30 secondi, 1 minuto e 5 minuti.
10. Ottimizzare le diluizioni degli anticorpi: Regolare le concentrazioni degli anticorpi primario e secondario quando necessario per ottenere un forte segnale specifico con un fondo minimo.