Substrato NeoPRO Nano Western ECL

Il Substrato ECL per Western Blot NeoPRO Nano è un substrato chemioluminescente a due componenti progettato per il Western blotting e il rilevamento di proteine basato su HRP. Offre un livello di rilevamento nel picogrammo medio ed è destinato ad applicazioni di routine di Western blot in cui è richiesto un rilevamento chemioluminescente affidabile di bersagli proteici.

Il substrato si basa su un sistema di rilevamento chemioluminescente derivato dal luminol. L'ossidazione catalizzata da perossidasi genera luce, mentre i componenti di reazione incorporati nella formulazione aumentano l'intensità e la durata del segnale. Ciò consente il rilevamento di proteine immobilizzate su membrane per Western blot dopo l'incubazione con gli anticorpi.

Il Substrato ECL per Western Blot NeoPRO Nano viene fornito come un kit di due soluzioni contenente una soluzione di derivato di luminol/potenziatore e una soluzione di perossido. Le due soluzioni vengono miscelate in un rapporto 1:1 immediatamente prima dell'uso per preparare la soluzione di lavoro.

Il substrato può essere utilizzato con i flussi di lavoro standard di Western blotting che includono SDS-PAGE, trasferimento su membrana, blocco e rilevamento con anticorpi coniugati a HRP. Gli intervalli di diluizione degli anticorpi raccomandati e la procedura di rilevamento chemioluminescente controllata forniscono un punto di partenza pratico per il rilevamento di proteine a livello di picogrammi medi.

• Substrato chemioluminescente a due componenti per Western blotting
• Progettato per il rilevamento di proteine a livello di picogrammi medi
• Rilevamento chemioluminescente dipendente da HRP
• Soluzione di derivato di luminol/potenziatore e soluzione di perossido fornite separatamente
• Soluzione di lavoro preparata mescolando i due componenti in un rapporto 1:1
• Adatto per applicazioni di routine di Western blot
• Compatibile con anticorpi secondari coniugati a HRP
• Adatto per l'acquisizione di segnali chemioluminescenti mediante dispositivi di imaging o pellicole per autoradiografia
• Diluizione raccomandata dell'anticorpo primario: 1:100–1:5.000
• Diluizione raccomandata dell'anticorpo secondario: 1:1.000–1:15.000
• Solo per uso di ricerca

1. Preparare la soluzione di lavoro: Miscelare la Soluzione A e la Soluzione B in un rapporto 1:1 immediatamente prima dell'uso.
2. Preparare la membrana: Dopo l'incubazione con l'anticorpo primario e l'anticorpo secondario coniugato a HRP, risciacquare la membrana due volte con TBS-T.
3. Applicare il substrato: Utilizzare circa 0,1 mL di soluzione di lavoro NeoPRO Nano per cm² di membrana.
4. Incubare: Assicurarsi che l'intera superficie della membrana sia coperta e incubare per circa 1,5 minuti.
5. Acquisire il segnale: Rilevare il segnale chemioluminescente utilizzando un dispositivo di imaging o una pellicola per autoradiografia.
6. Ottimizzare l'esposizione: Per un segnale sconosciuto, è possibile testare tempi di esposizione iniziali di 15 secondi, 30 secondi, 1 minuto e 5 minuti.