Substrato NeoPRO Pico PLUS per Western ECL

Il Substrato ECL Western NeoPRO Pico PLUS è un substrato chemiluminescente a due componenti sviluppato per il Western blotting e il rilevamento di proteine basato su HRP. Offre un livello di rilevamento nell'intervallo dei femtogrammi medi e combina un'alta sensibilità con un ampio intervallo dinamico lineare per il rilevamento e la quantificazione di bersagli proteici sia a bassa che ad alta abbondanza.

Il substrato si basa su un sistema di rilevamento chemiluminescente derivato dal luminol. Durante il rilevamento, la perossidasi di rafano catalizza l'ossidazione del derivato del luminol, generando luce a circa 425 nm. I componenti potenziatori incorporati nella formulazione aumentano l'intensità e la durata del segnale chemiluminescente.

Il Substrato ECL Western NeoPRO Pico PLUS viene fornito come kit di due soluzioni contenente una soluzione di derivato di luminol/potenziatore e una soluzione di perossido. Le due soluzioni vengono miscelate in un rapporto di 1:1 immediatamente prima dell'uso per preparare la soluzione di lavoro.

La sua elevata sensibilità, l'ampio intervallo dinamico lineare e la durata del segnale estremamente lunga lo rendono un substrato versatile per esperimenti di Western blot che richiedono un rilevamento affidabile di proteine con diversi livelli di abbondanza. La formulazione è progettata per richiedere una minore ottimizzazione pur supportando un'acquisizione accurata del segnale chemiluminescente tramite sistemi di imaging o pellicola per autoradiografia.

• Substrato chemiluminescente a due componenti per Western blotting
• Progettato per il rilevamento di proteine nell'intervallo dei femtogrammi medi
• Alta sensibilità per il rilevamento di bersagli proteici a bassa abbondanza
• Ampio intervallo dinamico lineare per l'analisi di proteine sia a bassa che ad alta abbondanza
• Adatto per un'accurata analisi quantitativa di Western blot
• Durata del segnale chemiluminescente estremamente lunga
• Formulazione versatile che richiede una minore ottimizzazione del saggio
• Rilevamento chemiluminescente dipendente da HRP
• Soluzioni di derivato di luminol/potenziatore e perossido fornite separatamente
• Soluzione di lavoro preparata miscelando i due componenti in un rapporto di 1:1
• Compatibile con anticorpi secondari coniugati con HRP
• Compatibile con membrane per Western blot in nitrocellulosa e PVDF
• Adatto per sistemi di imaging in chemiluminescenza e pellicola per autoradiografia
• Diluizione consigliata dell'anticorpo primario: 1:1.000–1:15.000
• Diluizione consigliata dell'anticorpo secondario: 1:25.000–1:150.000
• Solo per uso di ricerca

1. Preparare la soluzione di lavoro: Miscelare volumi uguali di Soluzione A e Soluzione B in un rapporto di 1:1 immediatamente prima dell'uso. Preparare solo il volume necessario per la membrana.
2. Evitare la contaminazione crociata: Utilizzare puntali per pipette puliti e separati per ciascuna soluzione madre. Non introdurre la Soluzione A nella Soluzione B o la Soluzione B nella Soluzione A.
3. Preparare la membrana: Dopo l'incubazione con l'anticorpo primario e l'anticorpo secondario coniugato con HRP, lavare accuratamente la membrana con tampone TBS-T.
4. Risciacquare prima del rilevamento: Rimuovere la membrana dalla vaschetta di lavaggio, sciacquarla due volte con TBS-T e mantenerla bagnata fino all'applicazione del substrato.
5. Rimuovere il tampone in eccesso: Lasciare scolare il tampone in eccesso da un angolo della membrana senza permettere che la membrana si asciughi.
6. Applicare il substrato: Applicare circa 0,1 mL di soluzione di lavoro NeoPRO Pico PLUS preparata per cm² di membrana.
7. Incubare: Posizionare la membrana con il lato delle proteine rivolto verso l'alto e assicurarsi che la soluzione di lavoro copra completamente la superficie della membrana. Incubare per circa 1,5 minuti.
8. Acquisire il segnale: Rilevare il segnale chemiluminescente utilizzando un dispositivo di imaging compatibile o una pellicola per autoradiografia.
9. Ottimizzare l'esposizione: Quando l'intensità del segnale attesa è sconosciuta, è possibile testare tempi di esposizione iniziali di 15 secondi, 30 secondi, 1 minuto e 5 minuti.
10. Ottimizzare le diluizioni degli anticorpi: Regolare le concentrazioni degli anticorpi primario e secondario quando necessario per ottenere un forte segnale specifico con un fondo minimo.