Substrato NeoPRO Pico Western ECL

Il Substrato Western ECL NeoPRO Pico è un substrato chemioluminescente a due componenti sviluppato per il Western blotting e il rilevamento di proteine basato su HRP. Offre un livello di rilevamento nel picogrammo basso ed è particolarmente adatto per il rilevamento di bersagli proteici abbondanti in esperimenti di routine di Western blot.

Il substrato si basa su un sistema di rilevamento chemioluminescente derivato dal luminol. Durante il rilevamento, la perossidasi di rafano catalizza l'ossidazione del derivato del luminol, producendo luce a circa 425 nm. I componenti potenziatori incorporati nella formulazione aumentano l'intensità e la durata del segnale chemioluminescente.

Il Substrato Western ECL NeoPRO Pico viene fornito come un kit di due soluzioni contenente una soluzione di derivato di luminol/potenziatore e una soluzione di perossido. I due componenti vengono miscelati in un rapporto 1:1 immediatamente prima dell'applicazione sulla membrana di Western blot.

La sua emissione di luce stabile e la sensibilità nel picogrammo basso lo rendono adatto all'analisi di routine di proteine altamente espresse. Il substrato può essere utilizzato con i flussi di lavoro standard di Western blot che includono SDS-PAGE, trasferimento su membrana, blocco, incubazione con l'anticorpo primario e rilevamento con anticorpo secondario coniugato a HRP.

• Substrato chemioluminescente a due componenti per Western blotting
• Progettato per il rilevamento di proteine nel picogrammo basso
• Adatto per bersagli proteici e campioni abbondanti
• Fornisce un'emissione di luce chemioluminescente stabile
• Rilevamento chemioluminescente dipendente da HRP
• Soluzione di derivato di luminol/potenziatore e soluzione di perossido fornite separatamente
• Soluzione di lavoro preparata miscelando i due componenti in un rapporto 1:1
• Adatto per applicazioni di routine di Western blot
• Compatibile con anticorpi secondari coniugati a HRP
• Compatibile con membrane per Western blot in nitrocellulosa e PVDF
• Adatto per l'acquisizione del segnale mediante sistemi di imaging per chemioluminescenza o pellicole per autoradiografia
• Diluizione raccomandata dell'anticorpo primario: 1:500–1:5.000
• Diluizione raccomandata dell'anticorpo secondario: 1:20.000–1:100.000
• Solo per uso di ricerca

1. Preparare la soluzione di lavoro: Miscelare volumi uguali di Soluzione A e Soluzione B in un rapporto 1:1 immediatamente prima dell'uso. Preparare solo il volume necessario per la membrana.
2. Evitare la contaminazione incrociata: Utilizzare puntali per pipette puliti e separati per ciascuna soluzione madre. Non introdurre la Soluzione A nella Soluzione B o viceversa.
3. Preparare la membrana: Dopo l'incubazione con l'anticorpo primario e l'anticorpo secondario coniugato a HRP, lavare accuratamente la membrana con tampone TBS-T.
4. Risciacquare prima del rilevamento: Rimuovere la membrana dalla vaschetta di lavaggio, risciacquarla due volte con TBS-T e mantenerla bagnata fino all'applicazione del substrato.
5. Rimuovere il tampone in eccesso: Lasciare scolare il tampone in eccesso da un angolo della membrana senza permettere alla membrana di asciugarsi.
6. Applicare il substrato: Applicare circa 0,1 mL di soluzione di lavoro NeoPRO Pico preparata per cm² di membrana.
7. Incubare: Posizionare la membrana con il lato delle proteine rivolto verso l'alto e assicurarsi che la soluzione di lavoro copra completamente la superficie della membrana. Incubare per circa 1,5 minuti.
8. Acquisire il segnale: Rilevare il segnale chemioluminescente utilizzando un dispositivo di imaging compatibile o una pellicola per autoradiografia.
9. Ottimizzare l'esposizione: Quando l'intensità del segnale atteso è sconosciuta, è possibile testare tempi di esposizione iniziali di 15 secondi, 30 secondi, 1 minuto e 5 minuti.
10. Ottimizzare le diluizioni degli anticorpi: Regolare le concentrazioni degli anticorpi primario e secondario quando necessario per ottenere un forte segnale specifico con un fondo minimo.