NeoPrep mini

NeoPrep mini

Descrizione

  • Neo Biotech miniprep kits (NB-60-0001) offrono un metodo rapido ed efficiente per estrarre DNA plasmidico puro da Escherichia coli.
  • Il processo prevede la lisi alcalina delle cellule batteriche e il legame del DNA alla silice in condizioni di elevata salinità.
  • Il DNA ottenuto è ideale per la PCR, il sequenziamento fluorescente automatizzato e varie applicazioni enzimatiche.
          

 

Condizioni di conservazione e preparazione dei reagenti

Tutti i componenti del kit possono essere conservati a temperatura ambiente (20-25 °C) e sono stabili fino alla data di scadenza. Prima dell'uso, aggiungere 1 mL di Buffer A1 alla fiala di RNase A e agitare. Trasferire la soluzione ottenuta nel flacone di Buffer A1 e mescolare accuratamente. Il tampone A1 con RNasi deve essere conservato a 4 °C per usi frequenti e a -20 °C per usi non frequenti. Aggiungere 32 mL di etanolo al 100% per biologia molecolare a ciascun flacone di tampone A4. Il tampone A2 può formare un precipitato durante la conservazione. Se necessario, sciogliere il precipitato riscaldando la soluzione a 37 °C. I tamponi A3 e AY contengono cloridrato di guanidina. Indossare guanti e occhiali di protezione quando si utilizza questo kit.

 

Componenti del sistema

• Buffer A1 - 15 mL

• Buffer A2 - 15 mL

• Buffer A3 - 20 mL                  

 

• Buffer AY - 30 mL

• Buffer A4 (concentrarsi) - 8 mL

• Buffer AE (non contiene EDTA) - 15 mL               

 

• RNase A - 5 mg

• Colonne centrifughe Neo Biotech - 50

• Provette di raccolta (2 mL) - 50

 

 

Coltivazione di colture batteriche:

 

  • Il terreno LB è consigliato per la coltivazione di cellule batteriche, ma si possono usare anche terreni ricchi come 2xYT o TB.
  • I terreni ricchi favoriscono una crescita più rapida e un ingresso precoce nella fase stazionaria rispetto a LB.
  • Tuttavia, l'uso di terreni ricchi può portare a un numero maggiore di cellule morte o affamate, con conseguente DNA plasmidico parzialmente degradato e potenziale contaminazione con DNA cromosomico.
  • Le colture troppo cresciute possono contenere un'eccessiva quantità di materiale batterico, che influisce sulle fasi di lisi e precipitazione.
  • Per iniziare, selezionare una singola colonia da una piastra selettiva e inoculare 1-5 mL di terreno LB con l'antibiotico appropriato.
  • Incubare per 12-16 ore a 37°C con agitazione vigorosa.