Les variants d’histones sont des protéines histones non canoniques qui diffèrent des histones canoniques du cœur nucléosomal par leur séquence en acides aminés, leurs profils de modifications post-traductionnelles (PTM) ou la présence de domaines spécialisés. Ils jouent un rôle essentiel dans l’organisation de la chromatine, la régulation du génome, la réparation de l’ADN, le contrôle transcriptionnel et la ségrégation chromosomique. Les variants d’histones recombinants et purifiés, notamment les variants H2A, les variants H3, les variants de l’histone de liaison H1 ainsi que des formes spécialisées telles que CENP-A, constituent des réactifs hautement définis pour les études mécanistiques, la biologie structurale, les essais enzymatiques, la validation d’anticorps et le développement de tests dans les domaines de la chromatine et de l’épigénétique.

Caractéristiques principales

• Options d’espèces et d’isoformes : Les protéines sont disponibles à partir de sources humaines, murines, aviaires, levuriennes et d’autres espèces, avec plusieurs isoformes et variants d’épissage lorsque cela est pertinent.
• Formats recombinants et proches de l’état natif : Disponibles sous forme de protéines non modifiées exprimées dans des systèmes bactériens, de protéines exprimées dans des systèmes eucaryotes portant des PTM complexes ou de protéines chimiquement modifiées présentant des modifications précisément définies.
• Constructions marquées et modifiées : Disponibles avec des étiquettes His-tag, FLAG, AviTag, GFP ou SNAP/CLIP, ainsi qu’avec des résidus cystéine introduits par ingénierie pour des applications de marquage ou de réticulation spécifiques à un site.
• Produits chromatiniens préassemblés : Des octamères d’histones contenant des variants, des mononucléosomes, des réseaux de nucléosomes ainsi que des nucléosomes CENP-A assemblés sur des séquences d’ADN définies sont disponibles pour les études avancées de la chromatine.
• Validation fonctionnelle : Le contrôle qualité comprend des analyses par SDS-PAGE, spectrométrie de masse des protéines intactes, essais fonctionnels spécifiques aux variants tels que la phosphorylation de γ-H2A.X et l’assemblage de nucléosomes CENP-A, ainsi que des analyses d’interaction protéique.

Applications courantes

• Études mécanistiques : Analyse du rôle des variants d’histones dans la régulation transcriptionnelle, la réponse aux dommages de l’ADN, le remodelage de la chromatine et la dynamique des nucléosomes.
• Biologie structurale : Génération d’échantillons homogènes pour la microscopie électronique cryogénique (cryo-EM), la cristallographie aux rayons X et la spectrométrie de masse après réticulation, à l’aide de nucléosomes contenant des variants.
• Essais enzymatiques : Utilisation comme substrats pour les protéines lectrices (« readers »), rédactrices (« writers ») et effectrices d’effacement (« erasers ») de la chromatine, qui reconnaissent des caractéristiques structurales spécifiques aux variants ou des interactions dépendantes des PTM.
• Essais d’assemblage et de remodelage de la chromatine : Évaluation de l’impact de l’incorporation des variants sur la stabilité des nucléosomes, l’efficacité du remodelage et l’organisation de la chromatine de haut ordre.
• Recherche sur les centromères et les kinétochores : Utilisation de nucléosomes CENP-A (CenH3) pour étudier l’identité centromérique, l’assemblage du kinétochore et les mécanismes de ségrégation chromosomique.
• Validation et développement d’anticorps : Utilisation de variants purifiés comme antigènes de référence pour évaluer la spécificité des anticorps dirigés contre des épitopes spécifiques aux variants ou contre des modifications post-traductionnelles.
• Biologie cellulaire et imagerie : Utilisation de variants fusionnés à la GFP ou marqués par des épitopes pour l’imagerie de cellules vivantes, les expériences de récupération de fluorescence après photoblanchiment (FRAP) et les études de localisation de la chromatine.