Les histones recombinantes sont des protéines histones hautement purifiées (H1, H2A, H2B, H3, H4 et leurs variants), exprimées dans des systèmes bactériens ou eucaryotes grâce à la technologie de l’ADN recombinant. Elles fournissent un matériel homogène, bien caractérisé et reproductible pour les applications biochimiques, structurales, épigénétiques et de développement de tests, lorsque l’isolement d’histones natives est difficile ou lorsqu’il est nécessaire d’utiliser des variants de séquence ou des modifications spécifiques de site. Les histones recombinantes sont disponibles sous forme de protéines individuelles, de combinaisons définies telles que les octamères d’histones, ou de variants modifiés contenant des mutations ponctuelles, des étiquettes épitopiques, des délétions partielles et des modifications post-traductionnelles (PTM) précisément définies.

Caractéristiques principales

• Haute pureté : Purifiées par des techniques chromatographiques telles que la chromatographie d’échange d’ions, la chromatographie liquide haute performance en phase inverse (RP-HPLC) et des protocoles optimisés de renaturation. Les niveaux de pureté dépassent généralement 95 % et sont vérifiés par SDS-PAGE et spectrométrie de masse.
• Fidélité de séquence : Disponibles sous forme d’histones canoniques de type sauvage ainsi que de nombreux variants et isoformes, notamment H3.1, H3.3, H2A.Z et macroH2A.
• Assemblages définis : Disponibles sous forme d’octamères d’histones recombinants, de particules cœur de nucléosome (NCP) et de réseaux de nucléosomes assemblés dans des conditions contrôlées de renaturation et de concentration saline.
• Contrôle qualité : Un contrôle qualité complet spécifique à chaque lot peut inclure l’analyse par SDS-PAGE, la spectrométrie de masse des protéines intactes, la cartographie peptidique, les essais de liaison à l’ADN et la validation de l’assemblage des octamères.

Applications courantes

• Reconstitution de la chromatine : Assemblage de mononucléosomes et de réseaux de nucléosomes pour la caractérisation biophysique et les études structurales par microscopie électronique (ME), cryomicroscopie électronique (cryo-ME) et cristallographie aux rayons X.
• Essais enzymatiques : Substrats idéaux pour les enzymes modifiant les histones, notamment les histone acétyltransférases (HAT), les histone désacétylases (HDAC), les histone méthyltransférases (HMT), les déméthylases, les kinases et les ubiquitine ligases, permettant la réalisation d’études cinétiques et de détermination des valeurs d’IC₅₀.
• Validation d’anticorps : Matériaux de référence pour évaluer la spécificité et la sélectivité des anticorps dirigés contre des modifications post-traductionnelles, par Western blot, dot blot et essais sur réseaux peptidiques.
• Recherche en épigénétique : Étude des protéines lectrices (« readers »), rédactrices (« writers »), effectrices d’effacement (« erasers ») et des complexes de remodelage de la chromatine à l’aide d’histones portant des PTM et des variants de séquence précisément définis.
• Analyses biophysiques : Études des interactions ADN-histones, de la stabilité des nucléosomes, du remodelage dépendant de la force ionique, des essais basés sur le FRET et des expériences à molécule unique.
• Développement de tests et criblage : Mise au point de plateformes de criblage à haut débit destinées à l’identification d’inhibiteurs et de modulateurs des enzymes modifiant les histones et des protéines régulatrices de la chromatine.
• Biologie structurale : Production de préparations homogènes de nucléosomes pour les analyses par cryo-ME et cristallographie, à partir de séquences d’histones et de modifications précisément définies.