NeoPRO Pico Western ECL Substrate

Le NeoPRO Pico Western ECL Substrate est un substrat chimiluminescent à deux composants développé pour le Western blot et la détection des protéines basée sur la peroxydase de raifort (HRP). Il offre un niveau de détection de l'ordre du faible picogramme et convient particulièrement à la détection des protéines fortement exprimées lors des expériences de Western blot de routine.

Ce substrat repose sur un système de détection chimiluminescent dérivé du luminol. Lors de la détection, la peroxydase de raifort (HRP) catalyse l'oxydation du dérivé de luminol, générant une émission lumineuse d'environ 425 nm. Les composants amplificateurs intégrés à la formulation augmentent l'intensité ainsi que la durée du signal chimiluminescent.

Le NeoPRO Pico Western ECL Substrate est fourni sous la forme d'un kit à deux solutions comprenant une solution contenant un dérivé de luminol et des amplificateurs de signal, ainsi qu'une solution de peroxyde. Les deux composants doivent être mélangés selon un rapport de 1:1 immédiatement avant leur application sur la membrane de Western blot.

Grâce à son émission lumineuse stable et à sa sensibilité de détection de l'ordre du faible picogramme, ce substrat est parfaitement adapté aux analyses de routine des protéines fortement exprimées. Il est compatible avec les protocoles standards de Western blot comprenant la séparation par SDS-PAGE, le transfert sur membrane, le blocage, l'incubation avec un anticorps primaire ainsi que la détection à l'aide d'un anticorps secondaire conjugué à la HRP.

• Substrat chimiluminescent à deux composants pour le Western blot
• Conçu pour la détection des protéines au niveau du faible picogramme
• Adapté aux protéines fortement et très fortement exprimées
• Produit un signal chimiluminescent stable et durable
• Détection chimiluminescente dépendante de la HRP
• Solutions de dérivé de luminol/amplificateur et de peroxyde fournies séparément
• Solution de travail préparée par mélange des deux composants selon un rapport 1:1
• Idéal pour les applications de Western blot de routine
• Compatible avec les anticorps secondaires conjugués à la HRP
• Compatible avec les membranes de Western blot en nitrocellulose et en PVDF
• Compatible avec les systèmes d'imagerie par chimiluminescence ou les films d'autoradiographie
• Dilution recommandée de l'anticorps primaire : 1:500 à 1:5 000
• Dilution recommandée de l'anticorps secondaire : 1:20 000 à 1:100 000
• Réservé à un usage de recherche uniquement

1. Préparer la solution de travail : Mélanger des volumes égaux des solutions A et B selon un rapport 1:1 immédiatement avant utilisation. Préparer uniquement le volume nécessaire pour la membrane.
2. Éviter toute contamination croisée : Utiliser des pointes de pipette propres et distinctes pour chaque solution mère. Ne jamais introduire la solution A dans la solution B, ni inversement.
3. Préparer la membrane : Après incubation avec l'anticorps primaire puis l'anticorps secondaire conjugué à la HRP, laver soigneusement la membrane avec un tampon TBS-T.
4. Rincer avant la détection : Retirer la membrane du bac de lavage, la rincer deux fois avec du TBS-T et la maintenir humide jusqu'à l'application du substrat.
5. Éliminer l'excès de tampon : Laisser s'écouler l'excès de tampon par un coin de la membrane sans laisser celle-ci sécher.
6. Appliquer le substrat : Déposer environ 0,1 mL de solution de travail NeoPRO Pico par cm² de membrane.
7. Incuber : Positionner la membrane, côté protéines vers le haut, en s'assurant que la solution recouvre entièrement sa surface. Incuber pendant environ 1,5 minute.
8. Acquérir le signal : Détecter le signal chimiluminescent à l'aide d'un système d'imagerie compatible ou d'un film d'autoradiographie.
9. Optimiser le temps d'exposition : Lorsque l'intensité attendue du signal est inconnue, tester des temps d'exposition initiaux de 15 secondes, 30 secondes, 1 minute et 5 minutes.
10. Optimiser les dilutions des anticorps : Ajuster si nécessaire les concentrations des anticorps primaire et secondaire afin d'obtenir un signal spécifique intense avec un bruit de fond minimal.