NeoStress

Le test de cellules vivantes antioxydantes Neostress a été développé à partir de la technologie Light Up Cell System qui permet un suivi fin de la production intracellulaire de ROS. La technologie a été optimisée pour un rendement élevé sur des plaques de 96 et 384 puits, adaptées aux lecteurs de fluorescence commerciaux, selon un protocole simple limité à l'ajout de la solution A1 dans le milieu de culture et à vingt séries de mesures d'illumination/fluorescence.

Mécanisme :

Le Neostress est basé sur l'activation d'un photosensibilisateur intracellulaire dans un protocole qui ne nécessite qu'une succession de flashs lumineux et de lectures de fluorescence. Le processus est appelé "light-up cell system" car le niveau de fluorescence du biocapteur augmente lors de sa photoinduction par l'illumination. Le biocapteur pénètre passivement dans les cellules mais est rapidement éliminé des cellules fonctionnelles par des protéines de transport d'efflux, ce qui se traduit par un faible signal fluorescent. Lorsque la lumière est appliquée, la photoinduction du biocapteur génère des ROS intracellulaires qui modifient l'homéostasie cellulaire ou la capacité de la cellule à libérer le biocapteur, ce qui déclenche son entrée massive dans les cellules et entraîne une augmentation du signal de fluorescence. L'augmentation de la fluorescence est retardée ou supprimée dans les cellules préalablement incubées avec une substance antioxydante agissant en neutralisant les radicaux libres produits par les cellules sous illumination.

Caractéristiques :  

• Pour 400 points de mesure dans des plaques à 96 puits
• Procédure en une étape
• Pas de lavage
• Stockage à 4°C
• Délai de péremption : 6 mois après réception
• Procédure standard pour la plupart des cellules primaires, hiPSCs, lignées cellulaires immortalisées,... (kit d'optimisation disponible si nécessaire)
• Peut être utilisé en multiplexage

Protocole général d'essai :

1. Préparer les échantillons concentrés 10X
2. Pour la condition de contrôle positif, ajouter 63μL de milieu de culture sans sérum dans le tube de solution B. Mélanger avec la pipette
3. Retirer le milieu de culture des cellules, puis ajouter 90μL de milieu de culture sans sérum.
4. Ajouter 10μL de contrôle positif et de conditions d'échantillon dans les puits.
5. Incuber pendant 1 heure dans l'incubateur
6. Pour 96 puits, préparer 3,13μL de solution A1 + 2596,9μL de milieu de culture sans sérum. Mélanger à l'aide de la pipette
7. Ajouter 25μL de cette solution A1 diluée par puits. Éviter l'exposition à une lumière excessive pendant cette étape et les étapes suivantes.
8. Incuber la plaque au temps déterminé pendant le protocole d'optimisation à température ambiante.
9. Lire la fluorescence (Fpre) aux longueurs d'onde suivantes :
10. λExcitation= 505nm (±10nm)
11. λEmission= 535nm (±10nm)
12. Illuminer la plaque à l'aide de l'illuminateur AOP (AOPLight B1 ou AOPLight HTS)
13. Lire la fluorescence (Fpost)
14. Répéter les étapes 10 et 11 vingt fois

N.B. : La fluorescence non spécifique peut être mesurée en lisant la fluorescence avant l'étape 6.

Sécurité :

Ce produit est destiné uniquement à la recherche et non à un usage humain ou thérapeutique. Potentiellement dangereux. Éviter l'exposition prolongée ou répétée. Éviter tout contact avec les yeux, la peau ou les vêtements. Se laver soigneusement après manipulation. En cas de contact avec les yeux ou la peau, laver les zones affectées à grande eau pendant 15 minutes et consulter un médecin. En cas d'inhalation ou d'ingestion, déplacer la personne à l'air frais et consulter immédiatement un médecin.

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