Protocole de révélation amplifiée : Gamme DBS
I. Matériel requis
Réactifs
- Anticorps primaire
- Diluant pour anticorps primaire
- Solution Pre-Blocking
- Milieu de montage
Tampons
- Tampon Immuno Wash
- Xylène ou réactifs de déparaffinage
- Ethanol absolu
- Eau distillée ou déminéralisée
II. Durée de l'expérimentation
- 10 min de blocage (optionnel)
- 30-60 min d'incubation des avec l'anticorps primaire
- 36 ou 31 min d'autres incubations
- 20 min de rinçage
- TOTAL : 1h31 à 2h06
III. Procédure de coloration
1. Peroxidase Block. Incuber les coupes dans le Peroxidase Block pendant 5 minutes.
Rincer les coupes 3 x 1 minutes avec le tampon Immuno Wash.
2. Pré-blocage (optionnel). Ajouter 2 gouttes (100 µL) ou un volume suffisant de solution Pre-Blocking pour couvrir la coupe de tissu (10 minutes).
Egoutter ou sécher. Ne pas rincer.
3. Anticorps primaire. Incuber avec l'anticorps primaire pendant 30 - 60 minutes, preparé selon les recommandations du fabricant à la concentration désirée. Les anticorps primaires concentrés peuvent être dilués dans le diluant.
Laver les coupes 3 x 1 minutes avec le tampon Immuno Wash.
4. Polymer Penetration Enhancer. Appliquer le Polymer Penetration Enhancer et incuber pendant 10 minutes.
Rincer les coupes 3 x 1 minutes avec le tampon Immuno Wash.
5. Marquage PolyVue. Incuber le tissu avec le réactif PolyVue HRP Label pendant 10 minutes
Laver les coupes 3 x 1 minutes avec le tampon Immuno Wash.
6. Stable DAB/Plus. Préparer la solution de travail du substrat Stable DAB/Plus.
Incuber le tissu pendant 5-10 minutes avec la solution préparée du substrat Stable DAB/Plus. Surveiller le niveau de coloration pour déterminer le temps d'incubation optimal.
Rincer les coupes 3 x 1 minutes avec de l'eau.
7. Contre-colorant. Incuber les tissus pendant 1 minute avec le contre-colorant (e.g. Hematoxylin).
Laver les coupes 3 x 1 minutes dans l'eau, suivi de 1 x 1 minute dans le tampon Immuno Wash, puis de 1 x 1 minute dans l'eau.
8. Déshydratation&Lamelles. Déshydrater les tissus par bains successifs d'éthanol, suivi par des bains de xylène .
Appliquer les lamelles avec un milieu de montage permanent.
IV.Moteur de recherche
- Anticorps primaire