Protocole général

Coffret composé de:

- 5 U/μl KAPA Long Range Polymerase
- Tampon 5X KAPA Long Range
- 25 mM MgCl2 solution
- 250μl KAPA dNTP Mix (10 mM chacun)


Remarques
- Dénaturer à 94°C, augmenter le temps de dénaturation pour les instruments à block rapide.
- Allonger à 68°C, en particulier pour la PCR de longs fragments ou à haute sensibilité.
- Remplacer la Taq pour la PCR standard, sans aucun changement de protocole.
- La demi-concentration de l'enzyme (1.25 U/50μl) peut être utilisée pour les cibles moyens.
- Le tampon est fourni à la concentration 5X avec le magnésium séparé pour l'optimisation.
- Les produits peuvent être clonés dans des vecteurs de clonage à extrémités sortantes 3'-T.

Protocole de PCR standard pour les fragments courts (jusqu'à 8 kb) et/ou des concentrations élevées d'ADN matrice

	Concentration finale	50 μl rxn
Eau de PCR jusqu'à 50μl	–	Selon besoins
Tampon 5X KAPA LR (sans Mg2+)	1X	10μl
MgCl2 (25 mM)	≥1.75 mM	3.5μl
dNTPs (10 mM de chaque dNTP)	0.3 mM	1.5μl
Amorce sens (10μM)	0.5μM	2.5μl
Amorce antisens (10μM)	0.5μM	2.5μl
Matrice	Selon besoins	Selon besoins
KAPA LongRange DNA Polymerase (5 U/μl)	1.25 U / 50μl	0.25μl
Total		50μl

Protocole de PCR standard pour les fragments longs (5 18 kb) et/ou pour les échantillons à faible concentration en ADN

	Concentration finale	50μl rxn
Eau de PCR jusqu'à 50μl	–	selon besoins
Tampon 5X KAPA LR (sans Mg2+)	1X	10μl
MgCl2 (25 mM)	1.75 mM	3.5μl
dNTPs (10 mM de chaque dNTP)	0.3 mM	1.5μl
Amorce sens (10μM)	0.5μM	2.5μl
Amorce antisens (10μM)	0.5μM	2.5μl
Matrice	selon besoins	selon besoins
KAPA LongRange DNA Polymerase (5 U/μl)	1.25 U / 50μl	0.25μl
Total		50μl

Protocole standard pour les très longs fragments (>15 kb) et/ou pour les échantillons à faible concentration en ADN

	Concentration finale	50μl rxn
Eau de PCR jusqu'à 50μl	–	selon besoins
Tampon 5X KAPA LR buffer (sans Mg2+)	1X	10μl
MgCl2 (25 mM)	1.75 mM	3.5μl
dNTPs (10 mM de chaque dNTP)	0.3 mM	1.5μl
Amorce sens (10μM)	0.5μM	2.5μl
Amorce antisens (10μM)	0.5μM	2.5μl
Matrice	selon besoins	selon besoins
KAPA LongRange DNA Polymerase (5 U/μl)	1.25 U / 50μl	0.25μl
Total		50μl

Produits

Désignation	Conditionnement	Référence
KAPA Long Range DNA polymerase	100 U	KK3006
	250 U	KK3005
KAPA Long Range HotStart DNA polymerase	100 U	KK3501
	250 U	KK3502
	500 U	KK3503
KAPA Long Range HotStart Readymix with Dye	100 rxn	KK3601
	500 rxn	KK3602

Résultats



Amplification de séries de dilution d'ADN lambda à partir de 1 ng jusqu'à 10 fg. La taille des fragments étaient de 2 kb, 8 kb et 15 kb. 35 cycles, 72 ° C de température d'extension, 1,25 unités d'enzyme.