Allophycocyanine (APC)-geconjugeerde anti-paard primaire antilichamen zijn verrood fluorescerende immunoreagentia die geoptimaliseerd zijn voor flowcytometrische toepassingen waarbij excitatie met een rode laser nodig is. Ze worden geproduceerd door gastheren zoals geit of konijn te immuniseren met gezuiverde paardenimmunoglobulinen, worden affiniteitsgezuiverd en geconjugeerd aan APC, een 105 kDa phycobiliproteïne afkomstig van cyanobacteriën met excitatie- en emissiemaxima van respectievelijk 650 nm en 660 nm. APC vertoont uitzonderlijke helderheid, met een hoge molaire extinctiecoëfficiënt (≈ 7,0 × 105 M−1cm−1) en een kwantumopbrengst van ongeveer 0,68, waardoor gevoelige detectie van equine antigenen die in zeer lage dichtheden tot expressie komen mogelijk is. De verrode emissie minimaliseert spectrale overlap met FITC en PE, waardoor APC bijzonder geschikt is voor meerkleurige immunofenotyperingspanelen. Beschikbare specificiteiten omvatten anti-IgG (H+L), anti-IgG-subklasse- en anti-IgM-reagentia. Vooradsorptie tegen muis-, rat-, konijn- en humane immunoglobulinen vermindert de kruisreactiviteit in multi-species experimentele monsters verder.
Toepassingen
APC-geconjugeerde anti-paard antilichamen worden veel gebruikt in flowcytometrie en fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS), waarbij hun hoge fluorescentie-intensiteit en compatibiliteit met rode lasers van 633–647 nm kwantitatieve immunofenotypering van equine leukocytenpopulaties en gevoelige detectie van intracellulaire cytokines mogelijk maken. In multiplex bead-gebaseerde assays fungeert APC als reporterfluorofoor voor de kwantificering van cytokines en andere biomarkers. Deze conjugaten worden ook gebruikt in immunofluorescentiemicroscopie en high-content imaging voor antigeenlokalizatie in gefixeerde cellen. Het verrode emissiespectrum helpt weefselautofluorescentie te verminderen, waardoor de signaal-achtergrondverhoudingen verbeteren. Typische werkverdunningen voor flowcytometrie liggen tussen 1:50 en 1:500. Deze reagentia zijn uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en zijn niet goedgekeurd voor diagnostische procedures.