Chloroform is een klassiek apolair oplosmiddel in de biochemie, onmisbaar voor lipidenextracties en fasescheidingen vanwege zijn dichtheid en selectieve oplosbaarheid voor amfipatische biomoleculen.

Chemische eigenschappen

Chloroform (CHCl₃) heeft een tetraëdrisch koolstofatoom gebonden aan drie chlooratomen en één waterstofatoom, en vormt een dichte, kleurloze vloeistof met een dichtheid van ongeveer 1,49 g/mL bij 25 °C. Het heeft een kookpunt van 61,2 °C en een smeltpunt van –63,5 °C. Chloroform vertoont lage oplosbaarheid in water (ongeveer 8 g/L), maar is mengbaar met veel organische oplosmiddelen zoals methanol en hexaan. Het dipoolmoment (1,04 D) maakt acceptatie van waterstofbruggen mogelijk. Het oplosmiddel is zeer vluchtig met een dampdruk van ongeveer 197 mmHg bij 25 °C. Gestabiliseerde kwaliteiten met ethanol of amyleen worden gewoonlijk gebruikt om de vorming van fosgeen onder licht- en zuurstofblootstelling te remmen.

Biochemische toepassingen

In de lipidebiochemie is chloroform een sleuteloplosmiddel in de Folch-extractiemethode (meestal in een verhouding 2:1 chloroform:methanol), die de verdeling van fosfolipiden en glycolipiden in de onderste organische fase mogelijk maakt voor daaropvolgende analytische technieken zoals dunne-laagchromatografie (TLC), gaschromatografie-massaspectrometrie (GC-MS) of kernspinresonantie (NMR)-analyse van vetzuren en gangliosiden. Het wordt ook gebruikt voor de extractie van membraaneiwitten of virale deeltjes uit waterige lysaten. In moleculairbiologische workflows wordt chloroform toegepast in fenol-chloroform-nucleïnezuurzuivering om eiwitten te denatureren terwijl de structurele integriteit van DNA en RNA behouden blijft. Daarnaast worden chloroform-wasstappen gebruikt in koolhydraatanalyse om restlipofiele verontreinigingen na hydrolyse te verwijderen, waardoor de monsterzuiverheid voor high-performance liquid chromatography (HPLC) verbetert.