Autofluorescentie quenchers zijn gespecialiseerde reagentia die worden gebruikt in fluorescente beeldvormingstechnieken om ongewenste achtergrondfluorescentie afkomstig van biologische monsters te verminderen of te elimineren. Deze intrinsieke fluorescentie, bekend als autofluorescentie, wordt vaak geproduceerd door endogene celcomponenten zoals lipofuscine, collageen, elastine, flavinen en andere natuurlijk fluorescerende moleculen, evenals door chemische fixatieprocessen die bij de monstervoorbereiding worden gebruikt.
In toepassingen van fluorescentiemicroscopie — waaronder immunofluorescentie (IF), immunohistochemie (IHC) en fluorescente Western blotting — kan autofluorescentie de signaalkwaliteit aanzienlijk verminderen door achtergrondruis te verhogen en zwakke targetspecifieke signalen te maskeren. Autofluorescentie quenchers worden daarom toegepast om contrast te verbeteren, de signaal-ruisverhouding te verhogen en een nauwkeurigere visualisatie van fluorescerend gelabelde targets mogelijk te maken.
Werkingsmechanisme
Autofluorescentie quenchers werken via verschillende fysisch-chemische mechanismen, afhankelijk van de formulering, waaronder:
- Chemische quenching van fluorescerende moleculen
- Absorptie of maskering van breedbandige autofluorescente emissies
- Interactie met lipofuscine-granules om hun fluorescentie-output te onderdrukken
- Reductie van aldehyde-geïnduceerde fluorescente crosslinks in gefixeerde weefsels
Typische toepassingen
Autofluorescentie quenchers worden vaak gebruikt bij:
- Immunofluorescentie (IF) beeldvorming van weefselcoupes
- Immunohistochemie (IHC) fluorescente detectie
- Neuroscience-onderzoek met lipofuscine-rijke weefsels
- Analyse van met formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde (FFPE) monsters
- Multiplex fluorescentiemicroscopie
- Hoge-sensitiviteitsstudies naar eiwitlokalisatie
- Fluorescente Western blot-toepassingen (specifieke formuleringen)
In tegenstelling tot blocking buffers, die niet-specifieke antistofbinding voorkomen, werken autofluorescentie quenchers op uitgezonden achtergrondfluorescentiesignalen, waardoor ze een verbeteringstool na fixatie of kleuring zijn in plaats van een oppervlakte-blokkerend reagens.