Histonacetyltransferase (HAT)-assays zijn analytische methoden die worden gebruikt om de enzymatische activiteit van histonacetyltransferasen te meten, enzymen die acetylgroepen overbrengen van acetyl-coënzym A (acetyl-CoA) naar lysineresten op histonproteïnen. Deze assays worden breed toegepast in epigenetica, chromatinebiologie en geneesmiddelenontwikkeling, omdat HAT-activiteit nauw verbonden is met genregulatie en chromatine-toegankelijkheid. Ze zijn ook waardevolle instrumenten voor het screenen van verbindingen die de HAT-functie remmen of moduleren.

Principe van de assay

Het fundamentele principe van een HAT-assay is de detectie van de overdracht van acetylgroepen van acetyl-CoA naar een histonsubstraat of een van histonen afgeleid peptide. Afhankelijk van het assay-formaat kan het reactieproduct worden gekwantificeerd met behulp van radio-isotooplabeling, fluorescentiegebaseerde detectie of colorimetrische aflezingen. Deze benaderingen ondersteunen zowel mechanistische enzymologische studies als hoogdoorvoerscreeningsapplicaties voor de identificatie van remmers.

Veelvoorkomende assay-formaten

HAT-assays zijn beschikbaar in verschillende formaten, waaronder radiometrische, fluorescerende en colorimetrische systemen.

• Radiometrische assays: Wordt vaak beschouwd als een referentiemethode omdat het de acetyloverdracht direct meet met behulp van gelabeld acetyl-CoA, wat een hoge gevoeligheid en specificiteit biedt.
• Fluorescentie-assays: Maakt snelle en gevoelige detectie mogelijk zonder het gebruik van radioactieve materialen en is compatibel met geautomatiseerde laboratoriumwerkstromen.
• Colorimetrische assays: Wordt vaak gebruikt in routinematige laboratoriumtoepassingen vanwege de eenvoud en compatibiliteit met 96-wells platenformaten voor efficiënt verbindingsscreening.