Het principe van chromatografie is gebaseerd op twee fasen: de mobiele fase, die het monster transporteert, en de stationaire fase, die de zuivering mogelijk maakt. Chromatografische harsen vormen deze stationaire fase.
Er zijn verschillende soorten chromatografie, afhankelijk van de gebruikte hars. De vier belangrijkste soorten chromatografie zijn affiniteitschromatografie, ionenuitwisselingschromatografie (IEX), hydrofobe interactiechromatografie (HIC), en grootte-exclusiechromatografie (SEC). De meeste zuiveringssystemen vereisen het gebruik van meerdere van deze types om de zuiverheid te bereiken die nodig is voor verdere toepassingen. De keuze en volgorde van de meest geschikte methoden zijn essentieel om een eiwitzuiveringsproces te optimaliseren.
Vergelijking van de belangrijkste chromatografietypes
| Type Chromatografie | Scheidingsprincipe | Interactie | Elutie |
|---|---|---|---|
| Affiniteit | Specifieke interactie | Geen competitieve ligand | Competitieve ligand (specifiek), verbreking van eiwit/eiwitinteracties door wijziging van omstandigheden (niet-specifiek) |
| Ionenuitwisseling | Netto oppervlaktebelasting | Lage ionsterkte | Hoge ionsterkte, verhoging (kationen) of verlaging (anionen) van de pH |
| Hydrofobe interacties | Hydrofobiciteit | Hoge ionsterkte | Lage ionsterkte |
| Grootte-exclusie | Hydrodynamische straal |
