Onderzoek

Volgende-generatiesequentiebepaling (NGS), ook bekend als high-throughput sequencing, is de verzamelnaam voor een aantal verschillende moderne sequencingtechnologieën, waaronder:
  • Illumina® (Solexa) sequencing
  • Roche 454-sequentiebepaling
  • Ion torrent: Proton / PGM-sequentiebepaling
  • SOLiD-sequentiebepaling
Deze recente technologieën stellen ons in staat om DNA en RNA veel sneller en goedkoper te sequencen dan de eerder gebruikte Sanger-sequencing, en hebben als zodanig een revolutie teweeggebracht in de studie van genomica en moleculaire biologie
 
De volgende generatie methoden voor DNA-sequentiebepaling bestaan uit drie algemene stappen:
 
  • Bibliotheekvoorbereiding: bibliotheken worden gemaakt door willekeurige fragmentatie van DNA, gevolgd door ligatie met aangepaste linkers.
  • Amplificatie: de bibliotheek wordt versterkt met behulp van klonale amplificatiemethoden en PCR
  • Sequenering: Het DNA wordt gesequenced met behulp van een van de verschillende benaderingen
Illumina® next-generation sequencing (NGS) technologie maakt gebruik van klonale amplificatie en sequencing by synthesis (SBS) chemie om snelle, nauwkeurige sequencing mogelijk te maken. Het proces identificeert tegelijkertijd DNA-basen terwijl ze in een nucleïnezuurketen worden opgenomen. Elke base zendt een uniek fluorescerend signaal uit wanneer deze wordt toegevoegd aan de groeiende streng, wat wordt gebruikt om de volgorde van de DNA-sequentie te bepalen.
NGS-technologie kan worden gebruikt om het DNA van elk organisme te sequentiëren, wat waardevolle informatie oplevert als antwoord op bijna elke biologische vraag. Als zeer schaalbare technologie kan DNA-sequentiebepaling worden toegepast op kleine, gerichte regio's of het hele genoom via verschillende methoden, waardoor onderzoekers gezondheid en ziekte kunnen onderzoeken en beter begrijpen.