Reagentia en instrumenten voor immunologie, celbiologie en moleculaire biologie.
 
> > > > Western blot protocol

Western blot protocol

Western blot protocol

 

Noodzakelijke producten:
 
Eiwitbereiding en scheiding door gelelektroforese
  1. Neem een klein volume eiwitmonster om de eiwitconcentratie te bepalen.
  2. Neem 20 µg eiwitten en voeg Laemmli
  3. Kook 5 minuten bij 95°C en centrifugeer de buisjes.
  4. Laad een gelijk volume eiwitten in de putjes van de SDS-PAGE-gel (acrylamide% afhankelijk van de grootte van het doeleiwit), en vergeet niet een putje voor controlegewicht ladders.
  5. Migratie bij constante stroomsterkte met geschikte buffer

Eiwittransfer van de gel naar het membraan
  1. Plaats de sandwich (gel/membraan/blotting papier) in de transferbox en zorg ervoor dat er geen luchtbellen zijn ingesloten.
  2. Transfer at constant voltage with the appropriate buffer


Incubatie en onthulling van antilichamen
  1. Kleur het membraan met Ponceau rood om de kwaliteit van de eiwittransfer te controleren.
  2. Haal het membraan eraf en incubeer in een blokkeeroplossing.
  3. Incubeer een nacht met het primaire antilichaam bij 4°C
  4. Rince de blot
  5. Incubeer met het secundaire antilichaam 1 uur bij kamertemperatuur.
  6. Het membraan rinkelen
  7. Breng het substraat aan op de blot