NeoPrep mini

NeoPrep mini

Omschrijving

  • Neo Biotech's miniprep kits (NB-60-0001) bieden een snelle en efficiënte manier om zuiver plasmide DNA uit Escherichia coli te extraheren.
  • Het proces omvat alkalische lysis van bacteriecellen en binding van DNA aan silica onder omstandigheden met een hoog zoutgehalte.
  • Het resulterende DNA is ideaal voor PCR, geautomatiseerde fluorescente sequencing en verschillende enzymatische toepassingen.
          

 

Opslagcondities en bereiding van reagentia

Alle kitcomponenten kunnen worden bewaard bij kamertemperatuur (20-25 °C) en zijn stabiel tot de vervaldatum. Voeg voor gebruik 1 ml Buffer A1 toe aan de RNase A-flacon en vortex. Breng de resulterende oplossing over in de Buffer A1-flacon en meng grondig. Buffer A1 met RNase moet worden bewaard bij 4 °C voor frequent gebruik en bij -20 °C voor onregelmatig gebruik. Voeg 32 ml ethanol van 100% moleculair biologische kwaliteit toe aan elk flesje buffer A4. Buffer A2 kan bij opslag een neerslag vormen. Los het neerslag zo nodig op door de oplossing bij 37 °C te verwarmen. Buffers A3 en AY bevatten guanidinehydrochloride. Draag handschoenen en een veiligheidsbril bij gebruik van deze kit.

 

Systeemonderdelen

• Buffer A1 - 15 mL

• Buffer A2 - 15 mL

• Buffer A3 - 20 mL                  

 

• Buffer AY - 30 mL

• Buffer A4 (concentraat) - 8 mL

• Buffer AE (bevat geen EDTA) - 15 mL               

 

• RNase A - 5 mg

• Neo Biotech draaikolommen - 50

•Verzamelbuisjes (2 mL) - 50

 

 

Kweken van bacterieculturen:

  • LB-medium wordt aanbevolen voor het kweken van bacteriële cellen, maar rijke media zoals 2xYT of TB kunnen ook worden gebruikt.
  • Rijke media bevorderen een snellere groei en vroege overgang naar de stationaire fase in vergelijking met LB.
  • Het gebruik van rijke media kan echter leiden tot meer dode of uitgehongerde cellen, wat resulteert in gedeeltelijk afgebroken plasmide DNA en mogelijke besmetting met chromosomaal DNA.
  • Overgroeide culturen kunnen overmatig bacterieel materiaal bevatten, wat de lysis- en precipitatiestappen beïnvloedt.
  • Selecteer om te beginnen een enkele kolonie van een selectieve plaat en inoculeer 1-5 ml LB-medium met het juiste antibioticum.
  • Incubeer 12-16 uur bij 37°C onder krachtig schudden.