NeoPRO Atto Western ECL-substraat

Het NeoPRO Atto Western ECL Substraat is een ultrasensitief, tweedelig chemiluminescent substraat ontworpen voor Western blotting en op HRP gebaseerde eiwitdetectie. Het biedt een extreem hoge signaalintensiteit voor de detectie van sporenhoeveelheden eiwit en is bijzonder geschikt voor doelwitten met een zeer lage en extreem lage abundantie.

Het substraat is gebaseerd op een van luminol afgeleid chemiluminescent detectiesysteem. Tijdens de detectie katalyseert mierikswortelperoxidase de oxidatie van het luminolderivaat, waarbij licht wordt geproduceerd bij ongeveer 425 nm. In de formulering verwerkte versterkende componenten verhogen de lichtopbrengst en genereren zeer heldere eiwitbanden binnen korte belichtingstijden.

Het NeoPRO Atto Western ECL Substraat is ontworpen om de detectie en interpretatie van de zwakste Western blot-banden te verbeteren. De zeer hoge gevoeligheid maakt het geschikt voor experimenten met minimale eiwithoeveelheden, beperkte hoeveelheden cellysaat of sterk verdunde antilichamen, wat helpt bij het behouden van waardevolle monsters en kostbare primaire antilichamen.

Het product wordt geleverd als een kit met twee oplossingen, bestaande uit een luminolderivaat-/versterkeroplossing en een peroxideoplossing. De twee componenten worden onmiddellijk vóór gebruik in een verhouding van 1:1 gemengd om de werkoplossing te bereiden.

• Ultrasensitief, tweedelig chemiluminescent substraat voor Western blotting
• Ontworpen voor de detectie van sporenhoeveelheden eiwit
• Extreem hoge chemiluminescente signaalintensiteit
• Geschikt voor eiwitdoelwitten met een extreem lage abundantie
• Produceert zeer heldere banden binnen korte belichtingstijden
• Verbetert de visualisatie en interpretatie van zwakke Western blot-banden
• Geschikt voor beperkte of waardevolle biologische monsters
• Ondersteunt het gebruik van sterk verdunde primaire en secundaire antilichamen
• Kan het verbruik van waardevolle monsters en dure antilichamen verminderen
• Op HRP gebaseerde chemiluminescente detectie
• Luminolderivaat-/versterkeroplossing en peroxideoplossing afzonderlijk geleverd
• Werkoplossing bereid door de twee componenten te mengen in een verhouding van 1:1
• Compatibel met aan HRP geconjugeerde secundaire antilichamen
• Compatibel met nitrocellulose en PVDF Western blot-membranen
• Geschikt voor chemiluminescentie-beeldvormingssystemen en autoradiografiefilm
• Aanbevolen verdunning primair antilichaam: 1:10.000–1:200.000
• Aanbevolen verdunning secundair antilichaam: 1:300.000–1:1.000.000
• Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

1. De werkoplossing bereiden: Meng gelijke volumes Oplossing A en Oplossing B in een verhouding van 1:1 onmiddellijk vóór gebruik.
2. Kruisbesmetting vermijden: Gebruik afzonderlijke, schone pipettips voor elke stockoplossing. Breng Oplossing A niet in Oplossing B en Oplossing B niet in Oplossing A.
3. Het membraan voorbereiden: Was het membraan na incubatie met het primaire antilichaam en het aan HRP geconjugeerde secundaire antilichaam grondig met TBS-T-buffer.
4. Spoelen vóór detectie: Verwijder het membraan uit de schaal, spoel het tweemaal met TBS-T en houd het nat totdat het substraat wordt aangebracht.
5. Overtollige buffer verwijderen: Laat overtollige buffer vanaf één hoek van het membraan weglopen zonder dat het membraan uitdroogt.
6. Het substraat aanbrengen: Breng ongeveer 0,1 mL van de bereide NeoPRO Atto werkoplossing aan per cm² membraan.
7. Incuberen: Plaats het membraan met de eiwitkant naar boven en zorg ervoor dat de werkoplossing het memoriaanoppervlak volledig bedekt. Incubeer gedurende ongeveer 1,5 minuten.
8. Het signaal registreren: Detecteer het chemiluminescente signaal met behulp van een compatibel beeldvormingsapparaat of autoradiografiefilm.
9. Begin met een korte belichting: Omdat NeoPRO Atto een extreem hoge lichtemissie produceert, begint u met een korte belichtingstijd en verlengt u deze alleen indien nodig.
10. Antilichaamverdunningen optimaliseren: Dilueer de antilichamen voldoende om een specifiek signaal te verkrijgen en tegelijkertijd achtergrond, verzadiging en snelle substraatuitputting te beperken.