NeoPRO Femto PLUS Western ECL-substraat

Het NeoPRO Femto PLUS Western ECL Substraat is een tweekomponenten-chemiluminescentiesubstraat ontworpen voor Western blotting en HRP-gebaseerde proteïnedetectie. Het biedt een detectieniveau in het lage femtogrambereik en is bijzonder geschikt voor het detecteren van zeer lage hoeveelheden eiwitten en doelen met een lage abundantie.

Het substraat is gebaseerd op een op luminol afgeleid chemiluminescentiedetectiesysteem. Tijdens de detectie katalyseert mierikswortelperoxidase de oxidatie van het luminolderivaat, waarbij licht bij ongeveer 425 nm wordt geproduceerd. Versterkende componenten die in de formulering zijn verwerkt, verhogen de intensiteit van het chemiluminescentiesignaal.

Het NeoPRO Femto PLUS Western ECL Substraat combineert een ultrahoge gevoeligheid met een uitstekende signaalintensiteit en een breed lineair dynamisch bereik. Dit ondersteunt kwantitatieve Western blot-analyse en maakt tegelijkertijd sterk verdunde antilichamen en een verminderd verbruik van waardevolle reagentia mogelijk.

Het product wordt geleverd als een set van twee oplossingen, bestaande uit een luminolderivaat-/versterkeroplossing en een peroxideoplossing. De twee componenten worden onmiddellijk vóór gebruik in een verhouding van 1:1 gemengd om de werkoplossing te bereiden.

• Tweekomponenten-chemiluminescentiesubstraat voor Western blotting
• Ontworpen voor proteïnedetectie in het lage femtogrambereik
• Ultrahoge gevoeligheid voor eiwitdoelen met een zeer lage abundantie
• Uitstekende chemiluminescentie-signaalintensiteit
• Geschikt voor het detecteren van zeer lage hoeveelheden eiwit
• Breed lineair dynamisch bereik voor kwantitatieve Western blot-analyse
• Ondersteunt het gebruik van sterk verdunde antilichamen
• Kan het verbruik van waardevolle primaire en secundaire antilichamen verminderen
• HRP-afhankelijke chemiluminescentiedetectie
• Luminolderivaat-/versterkeroplossing en peroxideoplossing apart geleverd
• Werkoplossing bereid door de twee componenten in een verhouding van 1:1 te mengen
• Compatibel met HRP-geconjugeerde secundaire antilichamen
• Compatibel met nitrocellulose- en PVDF-Western blot-membranen
• Geschikt voor chemiluminescentie-beeldvormingssystemen en autoradiografiefilm
• Aanbevolen verdunning van primair antilichaam: 1:5.000–1:100.000
• Aanbevolen verdunning van secundair antilichaam: 1:100.000–1:500.000
• Alleen voor onderzoeksdoeleinden

1. Werkoplossing bereiden: Meng gelijke volumes van Oplossing A en Oplossing B in een verhouding van 1:1 onmiddellijk vóór gebruik.
2. Kruisbesmetting voorkomen: Gebruik afzonderlijke, schone pipettips voor elke stockoplossing. Breng Oplossing A niet in Oplossing B en Oplossing B niet in Oplossing A.
3. Membraan voorbereiden: Was het membraan na de incubatie met het primaire en HRP-geconjugeerde secundaire antilichaam grondig met TBS-T-buffer.
4. Spoelen vóór detectie: Haal het membraan uit de schaal, spoel het tweemaal met TBS-T en houd het vochtig totdat het substraat wordt aangebracht.
5. Overtollige buffer verwijderen: Laat overtollige buffer van één hoek van het membraan aflopen zonder dat het membraan opdroogt.
6. Substraat aanbrengen: Breng ongeveer 0,1 mL van de voorbereide NeoPRO Femto PLUS-werkoplossing aan per cm² membraan.
7. Incuberen: Plaats het membraan met de eiwitkant naar boven en zorg ervoor dat de werkoplossing het membraanoppervlak volledig bedekt. Incubeer gedurende ongeveer 1,5 minuten.
8. Signaal detecteren: Detecteer het chemiluminescentiesignaal met behulp van een compatibel beeldvormingsapparaat of autoradiografiefilm.
9. Belichting optimaliseren: Wanneer de verwachte signaalintensiteit onbekend is, kunnen initiële belichtingstijden van 15 seconden, 30 seconden, 1 minuut en 5 minuten worden getest.
10. Antilichaamverdunningen optimaliseren: Vanwege de ultrahoge gevoeligheid van het substraat moeten de antilichamen voldoende worden verdund om een specifiek signaal te verkrijgen en tegelijkertijd achtergrond en verzadiging te beperken.