NeoPRO Pico Western ECL-substraat

Het NeoPRO Pico Western ECL Substraat is een tweekomponenten chemiluminescent substraat dat is ontwikkeld voor Western blotting en op HRP gebaseerde eiwitdetectie. Het biedt een detectieniveau in het lage picogrambereik en is met name geschikt voor het detecteren van overvloedige eiwitdoelwitten in routinematige Western blot-experimenten.

Het substraat is gebaseerd op een van luminol afgeleid chemiluminescent detectiesysteem. Tijdens de detectie katalyseert mierikswortelperoxidase de oxidatie van het luminolderivaat, waarbij licht wordt geproduceerd bij ongeveer 425 nm. Verbeterende componenten die in de formulering zijn verwerkt, verhogen de intensiteit en duur van het chemiluminescente signaal.

Het NeoPRO Pico Western ECL Substraat wordt geleverd als een kit met twee oplossingen die een luminolderivaat-/enhanceroplossing en een peroxideoplossing bevat. De twee componenten worden in een verhouding van 1:1 gemengd onmiddellijk voor toepassing op het Western blot-membraan.

De stabiele lichtopbrengst en lage picogramgevoeligheid maken het geschikt voor routinematige analyse van hoog tot expressie gebrachte eiwitten. Het substraat kan worden gebruikt met standaard Western blot-workflows met SDS-PAGE, membraanoverdracht, blokkeren, incubatie met primair antilichaam en detectie met HRP-geconjugeerd secundair antilichaam.

• Tweekomponenten chemiluminescent substraat voor Western blotting
• Ontworpen voor eiwitdetectie in het lage picogrambereik
• Geschikt voor overvloedige eiwitdoelwitten en monsters
• Biedt een stabiele chemiluminescente lichtopbrengst
• HRP-afhankelijke chemiluminescente detectie
• Luminolderivaat/enhancer- en peroxideoplossing apart geleverd
• Werkoplossing bereid door de twee componenten te mengen in een verhouding van 1:1
• Geschikt voor routinematige Western blot-toepassingen
• Compatibel met HRP-geconjugeerde secundaire antilichamen
• Compatibel met nitrocellulose en PVDF Western blot-membranen
• Geschikt voor signaalacquisitie met behulp van chemiluminescentie-beeldvormingssystemen of autoradiografiefilm
• Aanbevolen verdunning van primair antilichaam: 1:500–1:5.000
• Aanbevolen verdunning van secundair antilichaam: 1:20.000–1:100.000
• Uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

1. Bereid de werkoplossing: Meng gelijke volumes Oplossing A en Oplossing B in een verhouding van 1:1 onmiddellijk voor gebruik. Bereid alleen het volume dat nodig is voor het membraan.
2. Voorkom kruisbesmetting: Gebruik afzonderlijke, schone pipetteerpunten voor elke voorraadoplossing. Breng Oplossing A niet in Oplossing B en vice versa.
3. Bereid het membraan voor: Was het membraan na incubatie met het primaire en HRP-geconjugeerde secundaire antilichaam grondig met TBS-T-buffer.
4. Spoel vóór detectie: Verwijder het membraan uit de wasbak, spoel het tweemaal met TBS-T en houd het nat totdat het substraat wordt aangebracht.
5. Verwijder overtollige buffer: Laat overtollige buffer vanaf één hoek van het membraan weglopen zonder dat het membraan uitdroogt.
6. Breng het substraat aan: Breng ongeveer 0,1 mL bereide NeoPRO Pico-werkoplossing per cm² membraan aan.
7. Incubeer: Plaats het membraan met de eiwitzijde naar boven en zorg ervoor dat de werkoplossing het membraanoppervlak volledig bedekt. Incubeer gedurende ongeveer 1,5 minuut.
8. Acquireer het signaal: Detecteer het chemiluminescente signaal met behulp van een compatibel beeldvormingsapparaat of autoradiografiefilm.
9. Optimaliseer de belichting: Wanneer de verwachte signaalintensiteit onbekend is, kunnen initiële belichtingstijden van 15 seconden, 30 sekunden (of seconden), 1 minuut en 5 minuten worden getest.
10. Optimaliseer antilichaamverdunningen: Pas de concentraties van het primaire en secundaire antilichaam indien nodig aan om een sterk specifiek signaal te verkrijgen met minimale achtergrond.