Tampão de transferência para Western blot é um reagente essencial na transferência eletroforética de proteínas, permitindo a migração de proteínas de géis SDS-PAGE para membranas de nitrocelulose ou PVDF destinadas à imunodetecção posterior. Desde o trabalho pioneiro de Towbin, Staehelin e Gordon, que demonstrou a transferência eletroforética de proteínas de géis de poliacrilamida para membranas de nitrocelulose, a composição do tampão de transferência permanece fundamental para o desempenho, a reprodutibilidade e a qualidade do sinal em Western blot.
Papel na eficiência da transferência de proteínas
Um tampão padrão de transferência para Western blot geralmente contém Tris base e glicina, com adição frequente de metanol para favorecer a ligação das proteínas à membrana e ajudar a manter a integridade do gel durante a eletrotransferência. Na técnica de Western blot baseada em SDS-PAGE, as proteínas são separadas de acordo com o peso molecular e depois imobilizadas em uma membrana, onde permanecem acessíveis aos anticorpos, conforme descrito nos estudos clássicos de imunotransferência de Burnette. O tampão deve, portanto, fornecer força iônica e condutividade adequadas, preservando o padrão proteico obtido durante a eletroforese.
Otimização para aplicações de Western blot
O tampão de transferência ideal depende do tamanho da proteína, da porcentagem do gel, do sistema de transferência e do tipo de membrana. Tampões contendo metanol são amplamente utilizados para muitos alvos de rotina, enquanto formulações com menor concentração de metanol ou suplementadas com SDS podem melhorar a transferência de proteínas de alto peso molecular. Entretanto, excesso de SDS ou condições inadequadas do tampão podem aumentar o fundo, gerar calor ou reduzir a retenção eficiente na membrana. Para uma análise confiável por Western blot, a escolha do tampão correto é essencial para maximizar a recuperação proteica, manter a resolução das bandas e melhorar a sensibilidade dos métodos de detecção quimioluminescente, colorimétrico ou fluorescente.
Referências
- Towbin H., Staehelin T., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets. PNAS, 1979;76(9):4350–4354. DOI: 10.1073/pnas.76.9.4350.
- Burnette W.N. “Western blotting”: electrophoretic transfer of proteins from SDS-polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose. Analytical Biochemistry, 1981;112(2):195–203. DOI: 10.1016/0003-2697(81)90281-5.
