Ensaios de histona acetiltransferase (HAT) são métodos analíticos usados para medir a atividade enzimática das histona acetiltransferases, enzimas que transferem grupos acetila da acetil-coenzima A (acetil-CoA) para resíduos de lisina em proteínas histonas. Esses ensaios são amplamente aplicados em epigenética, biologia da cromatina e descoberta de fármacos, pois a atividade da HAT está estreitamente associada à regulação gênica e à acessibilidade da cromatina. Eles também são ferramentas valiosas para a triagem de compostos que inibem ou modulam a função da HAT.

Princípio do ensaio

O princípio fundamental de um ensaio de HAT é a detecção da transferência de grupos acetila da acetil-CoA para um substrato de histona ou um peptídeo derivado de histona. Dependendo do formato do ensaio, o produto da reação pode ser quantificado usando marcação com radioisótopos, detecção baseada em fluorescência ou leituras colorimétricas. Essas abordagens apoiam tanto estudos mecanicistas de enzymologia quanto aplicações de triagem de alto rendimento para identificação de inibidores.

Formatos comuns de ensaios

Os ensaios de HAT estão disponíveis em vários formatos, incluindo sistemas radiométricos, fluorescentes e colorimétricos.

• Ensaio radiométrico: Muitas vezes considerado um método de referência porque mede diretamente a transferência de acetila usando acetil-CoA marcada, oferecendo alta sensibilidade e especificidade.
• Ensaio fluorescente: Permite detecção rápida e sensível sem o uso de materiais radioativos e é compatível com fluxos de trabalho laboratoriais automatizados.
• Ensaio colorimétrico: Frequentemente usado em aplicações laboratoriais de rotina devido à sua simplicidade e compatibilidade com formatos de placas de 96 poços para triagem eficiente de compostos.