Membranas de nitrocelulose são membranas porosas compostas por nitrocelulose (ou, em algumas formulações comerciais, por uma matriz de ésteres mistos de celulose), utilizadas como suporte sólido para a imobilização de proteínas, glicoproteínas e ácidos nucleicos. Introduzidas pela primeira vez para blotting de proteínas em 1967, as membranas de nitrocelulose continuam sendo uma das matrizes de blotting mais utilizadas atualmente.
Propriedades e mecanismo de ligação
A ligação das proteínas à nitrocelulose ocorre principalmente por meio de uma combinação de interações hidrofóbicas e eletrostáticas. Essa ligação é descrita como instantânea e praticamente irreversível, com uma capacidade quantitativa geralmente citada entre 80 e 100 µg/cm². Como exemplo comercial, a membrana Immobilon-NC da Merck, baseada em uma matriz de ésteres mistos de celulose, está disponível em uma versão hidrofílica com tamanho de poro de 0,45 µm e apresenta capacidades de adsorção documentadas de aproximadamente 117 µg/cm² para insulina, 160 µg/cm² para BSA e 259 µg/cm² para IgG de cabra. A nitrocelulose é facilmente umedecida com água ou tampão de transferência e é compatível com métodos de detecção colorimétricos, quimioluminescentes e com a maioria dos métodos fluorescentes. Uma limitação reconhecida é que a nitrocelulose sem suporte é naturalmente frágil; os formatos de nitrocelulose suportada, construídos sobre uma estrutura de suporte inerte, oferecem maior resistência mecânica e podem suportar reprovação (reprobing) e autoclavagem a 121 °C. A nitrocelulose também é solúvel em solventes orgânicos, como metanol e acetona; portanto, a exposição a esses solventes deve ser limitada para preservar a integridade da membrana.
Aplicações
As membranas de nitrocelulose são utilizadas como suporte sólido em técnicas de blotting de proteínas e ácidos nucleicos, incluindo western blot, northern blot e Southern blot, bem como em procedimentos de transferência de colônias e placas (colony e plaque lift). No western blot, em particular, elas são amplamente utilizadas devido à sua elevada afinidade de ligação por proteínas de baixo a médio peso molecular, ao baixo ruído de fundo e à compatibilidade com diversos métodos de detecção, geralmente com custo relativamente baixo. Em comparação com as membranas de PVDF, as membranas de nitrocelulose frequentemente apresentam uma melhor relação sinal-ruído em detecções por fluorescência, enquanto as membranas de PVDF tendem a produzir sinais quimioluminescentes mais intensos e maior sensibilidade para proteínas de baixa abundância. Em geral, a nitrocelulose é considerada menos adequada para aplicações de transferência de ácidos nucleicos, como o blotting de RNA, uma vez que as condições de alta concentração de sal que favorecem a ligação de proteínas podem interferir nas interações dependentes de carga necessárias para a retenção dos ácidos nucleicos.
