Substrato NeoPRO Femto PLUS Western ECL

O substrato ECL para Western blot NeoPRO Femto PLUS é um substrato quimioluminiscente de dois componentes concebido para Western blotting e deteção de proteínas baseada em HRP. Oferece um nível de deteção de femtogramas baixos e é particularmente adequado para detetar quantidades muito baixas de proteínas e alvos de baixa abundância.

O substrato baseia-se num sistema de deteção quimioluminiscente derivado do luminol. Durante a deteção, a peroxidase de rábano silvestre catalisa a oxidação do derivado de luminol, produzindo luz a aproximadamente 425 nm. Os componentes potenciadores incorporados na formulação aumentam a intensidade do sinal quimioluminiscente.

O substrato ECL para Western blot NeoPRO Femto PLUS combina uma sensibilidade ultraelevada com uma excelente intensidade de sinal e um amplo intervalo dinâmico linear. Isto apoia a análise quantitativa por Western blot, permitindo simultaneamente anticorpos altamente diluídos e um menor consumo de reagentes valiosos.

O produto é fornecido como um kit de duas soluções contendo uma solução de derivado de luminol/potenciador e uma solução de peróxido. Os dois componentes são misturados numa proporção de 1:1 imediatamente antes da utilização para preparar a solução de trabalho.

• Substrato quimioluminiscente de dois componentes para Western blotting
• Concebido para deteção de proteínas no intervalo de femtogramas baixos
• Sensibilidade ultraelevada para alvos proteicos de muito baixa abundância
• Excelente intensidade de sinal quimioluminiscente
• Adequado para detetar quantidades muito baixas de proteínas
• Amplo intervalo dinâmico linear para análise quantitativa por Western blot
• Apoia a utilização de anticorpos altamente diluídos
• Pode reduzir o consumo de anticorpos primários e secundários valiosos
• Deteção quimioluminiscente dependente de HRP
• Solução de derivado de luminol/potenciador e solução de peróxido fornecidas separadamente
• Solução de trabalho preparada misturando os dois componentes numa proporção de 1:1
• Compatível com anticorpos secundários conjugados com HRP
• Compatível com membranas de nitrocelulose e PVDF para Western blot
• Adequado para sistemas de imagem de quimioluminescencia e películas de autorradiografia
• Diluição recomendada do anticorpo primário: 1:5.000–1:100.000
• Diluição recomendada do anticorpo secundário: 1:100.000–1:500.000
• Apenas para uso em investigação

1. Preparar a solução de trabalho: Misturar volumes iguais da Solução A e da Solução B numa proporção de 1:1 imediatamente antes da utilização.
2. Evitar a contaminação cruzada: Utilizar pontas de pipeta limpas e separadas para cada solução stock. Não introduzir a Solução A na Solução B nem a Solução B na Solução A.
3. Preparar a membrana: Após a incubação com o anticorpo primário e o anticorpo secundário conjugado com HRP, lavar a membrana minuciosamente com tampão TBS-T.
4. Enxaguar antes da deteção: Retirar a membrana do seu tabuleiro, enxaguá-la duas vezes com TBS-T e mantê-la húmida até que o substrato seja aplicado.
5. Remover o excesso de tampão: Permitir que o excesso de tampão escoe a partir de um canto da membrana, sem permitir que esta se seque.
6. Aplicar o substrato: Aplicar aproximadamente 0,1 mL da solução de trabalho NeoPRO Femto PLUS preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Colocar a membrana com o lado das proteínas virado para cima e garantir que a solução de trabalho cobre completamente a superfície da membrana. Incubar durante aproximadamente 1,5 minutos.
8. Adquirir o sinal: Detetar o sinal quimioluminiscente utilizando um dispositivo de imagem compatível ou uma película de autorradiografia.
9. Optimizar a exposição: Quando a intensidade de sinal esperada for desconhecida, podem ser testados tempos de exposição iniciais de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto e 5 minutos.
10. Optimizar as diluições dos anticorpos: Devido à sensibilidade ultraelevada do substrato, diluir os anticorpos de forma suficiente para obter um sinal específico, limitando simultaneamente o fundo e a saturação.