Substrato NeoPRO Atto para Western ECL

O Substrato ECL para Western blot NeoPRO Atto é um substrato quimioluminiscente ultrasensível de dois componentes, concebido para Western blotting e deteção de proteínas baseada em HRP. Oferece uma intensidade de sinal extremamente elevada para a deteção de quantidades vestigiais de proteínas e é particularmente adequado para alvos de abundância muito baixa e extremamente baixa.

O substrato baseia-se num sistema de deteção quimioluminiscente derivado do luminol. Durante a deteção, a peroxidase de rábano silvestre catalisa a oxidação do derivado de luminol, produzindo luz a aproximadamente 425 nm. Os componentes potenciadores incorporados na formulação aumentam a emissão de luz, gerando bandas de proteínas muito brilhantes em curtos tempos de exposição.

O Substrato ECL para Western blot NeoPRO Atto foi concebido para melhorar a deteção e a interpretação das bandas de Western blot mais ténues. A sua sensibilidade muito elevada torna-o adequado para experiências que envolvam quantidades mínimas de proteínas, quantidades limitadas de lisado celular ou anticorpos altamente diluídos, ajudando a preservar amostras valiosas e anticorpos primários dispendiosos.

O produto é fornecido como um kit de duas soluções contendo uma solução de derivado de luminol/potenciador e uma solução de peróxido. Os dois componentes são misturados numa proporção de 1:1 imediatamente antes da utilização para preparar a solução de trabalho.

• Substrato quimioluminiscente ultrasensível de dois componentes para Western blotting
• Concebido para a deteção de quantidades vestigiais de proteínas
• Intensidade de sinal quimioluminiscente extremamente elevada
• Adequado para alvos proteicos de abundância extremamente baixa
• Produz bandas muito brilhantes em curtos tempos de exposição
• Melhora a visualização e a interpretação de bandas de Western blot ténues
• Adequado para amostras biológicas limitadas ou valiosas
• Apoia a utilização de anticorpos primários e secundários altamente diluídos
• Pode reduzir o consumo de amostras valiosas e anticorpos dispendiosos
• Deteção quimioluminiscente dependente de HRP
• Solução de derivado de luminol/potenciador e solução de peróxido fornecidas separadamente
• Solução de trabalho preparada misturando os dois componentes numa proporção de 1:1
• Compatível com anticorpos secundários conjugados com HRP
• Compatível com membranas de nitrocelulose e PVDF para Western blot
• Adequado para sistemas de imagem de quimioluminescência e películas de autorradiografia
• Diluição recomendada do anticorpo primário: 1:10.000–1:200.000
• Diluição recomendada do anticorpo secundário: 1:300.000–1:1.000.000
• Apenas para uso em investigação

1. Preparar a solução de trabalho: Misturar volumes iguais da Solução A e da Solução B numa proporção de 1:1 imediatamente antes da utilização.
2. Evitar a contaminação cruzada: Utilizar pontas de pipeta limpas e separadas para cada solução stock. Não introduzir a Solução A na Solução B nem a Solução B na Solução A.
3. Preparar a membrana: Após a incubação com o anticorpo primário e o anticorpo secundário conjugado com HRP, lavar a membrana minuciosamente com tampão TBS-T.
4. Enxaguar antes da deteção: Retirar a membrana do seu tabuleiro, enxaguá-la duas vezes com TBS-T e mantê-la húmida até que o substrato seja aplicado.
5. Remover o excesso de tampão: Permitir que o excesso de tampão escoe a partir de um canto da membrana, sem permitir que esta se seque.
6. Aplicar o substrato: Aplicar aproximadamente 0,1 mL da solução de trabalho NeoPRO Atto preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Colocar a membrana com o lado das proteínas virado para cima e garantir que a solução de trabalho cobre completamente a superfície da membrana. Incubar durante aproximadamente 1,5 minutos.
8. Adquirir o sinal: Detetar o sinal quimioluminiscente utilizando um dispositivo de imagem compatível ou uma película de autorradiografia.
9. Começar com uma exposição curta: Uma vez que o NeoPRO Atto produz uma emissão de luz extremamente elevada, começar com um tempo de exposição curto e aumentá-lo apenas quando necessário.
10. Optimizar as diluições dos anticorpos: Diluir os anticorpos de forma suficiente para obter um sinal específico, limitando simultaneamente o fundo, a saturação e o esgotamento rápido do substrato.