Substrato NeoPRO Pico PLUS para Western ECL

O Substrato ECL Western NeoPRO Pico PLUS é um substrato quimioluminescente de dois componentes desenvolvido para Western blotting e detecção de proteínas baseada em HRP. Ele fornece um nível de detecção na faixa de femtogramas médios e combina alta sensibilidade com uma ampla faixa dinâmica linear para a detecção e quantificação de alvos proteicos de baixa e alta abundância.

O substrato baseia-se em um sistema de detecção quimioluminiscente derivado de luminol. Durante a detecção, a peroxidase de rábano catalisa a oxidação do derivado de luminol, gerando luz a aproximadamente 425 nm. Componentes intensificadores incorporados na formulação aumentam a intensidade e a duração do sinal quimioluminiscente.

O Substrato ECL Western NeoPRO Pico PLUS é fornecido como um kit de duas soluções contendo uma solução de derivado de luminol/intensificador e uma solução de peróxido. As duas soluções são misturadas na proporção de 1:1 imediatamente antes do uso para preparar a solução de trabalho.

Sua alta sensibilidade, ampla faixa dinâmica linear e duração de sinal extremamente longa tornam-no um substrato versátil para experimentos de Western blot que exigem detecção confiável de proteínas com diferentes níveis de abundância. A formulação foi desenvolvida para exigir menos otimização, ao mesmo tempo em que suporta a aquisição precisa de sinais quimioluminiscentes usando sistemas de imagem ou filme de autorradiografia.

• Substrato quimioluminiscente de dois componentes para Western blotting
• Desenvolvido para detecção de proteínas na faixa de femtogramas médios
• Alta sensibilidade para a detecção de alvos proteicos de baixa abundância
• Ampla faixa dinâmica linear para a análise de proteínas de baixa e alta abundância
• Adequado para análise quantitativa precisa de Western blot
• Duração do sinal quimioluminiscente extremamente longa
• Formulação versátil que requer menor otimização do ensaio
• Detecção quimioluminiscente dependente de HRP
• Soluções de derivado de luminol/intensificador e peróxido fornecidas separadamente
• Solução de trabalho preparada misturando os dois componentes na proporção de 1:1
• Compatível com anticorpos secundários conjugados com HRP
• Compatível com membranas de nitrocelulose e PVDF para Western blot
• Adequado para sistemas de imagem quimioluminiscente e filme de autorradiografia
• Diluição recomendada do anticorpo primário: 1:1.000–1:15.000
• Diluição recomendada do anticorpo secundário: 1:25.000–1:150.000
• Apenas para uso em pesquisa

1. Preparar a solução de trabalho: Misture volumes iguais da Solução A e da Solução B em uma proporção de 1:1 imediatamente antes do uso. Prepare apenas o volume necessário para a membrana.
2. Evitar contaminação cruzada: Use ponteiras de pipeta limpas e separadas para cada solução de estoque. Não introduza a Solução A na Solução B nem a Solução B na Solução A.
3. Preparar a membrana: Após a incubação com o anticorpo primário e o anticorpo secundário conjugado com HRP, lave a membrana minuciosamente com tampão TBS-T.
4. Enxaguar antes da detecção: Remova a membrana da bandeja de lavagem, enxágue-a duas vezes com TBS-T e mantenha-a úmida até que o substrato seja aplicado.
5. Remover o excesso de tampão: Permita que o excesso de tampão escoe de um canto da membrana sem permitir que a membrana seque.
6. Aplicar o substrato: Aplique aproximadamente 0,1 mL da solução de trabalho NeoPRO Pico PLUS preparada por cm² de membrana.
7. Incubar: Coloque a membrana com o lado das proteínas para cima e certifique-se de que a solução de trabalho cubra completamente a superfície da membrana. Incube por aproximadamente 1,5 minuto.
8. Adquirir o sinal: Detecte o sinal quimioluminiscente usando um dispositivo de imagem compatível ou filme de autorradiografia.
9. Otimizar a exposição: Quando a intensidade de sinal esperada for desconhecida, tempos de exposição iniciais de 15 segundos, 30 segundos, 1 minuto e 5 minutos podem ser testados.
10. Otimizar as diluições de anticorpos: Ajuste as concentrações dos anticorpos primário e secundário quando necessário para obter um sinal específico forte com fundo mínimo.