NeoTaqII DNA polimerase

Descrição

A nova geração de polimerases de ADN derivadas de Taq NB-60-0005 optimizado para aplicações PCR padrão.
Concebida para produzir elevados rendimentos de ADN em tempos de execução de PCR mais curtos (15-30 s/kb de extensão).
Não possui atividade de exonuclease 3'→5' e suporta a amplificação fiável de uma vasta gama de modelos de ADN até 6 kb.
Adequado para PCR em condições de otimização mínimas.

Condições de armazenamento

Todos os componentes devem ser armazenados a -20°C num congelador sem ciclos de descongelação para garantir um prazo de validade máximo.
A enzima permanece estável a 4°C ou à temperatura ambiente até 3 dias sem comprometer a sua estabilidade.
O produto permanecerá estável até ao prazo de validade se for armazenado conforme especificado.

Definição da unidade

Uma unidade da enzima é definida como a quantidade necessária para catalisar a incorporação de 10 nmoles de dNTPs em material insolúvel em ácido em 30 minutos a 72 °C em condições de ensaio controladas.

Concentração de enzimas

Solução de cloreto de magnésio

Uma solução fornecida de 50 mM MgCl2 permite aos utilizadores otimizar a concentração de Mg2+ nas configurações de PCR.
Uma concentração de 2,5 mM de MgCl2 é geralmente eficaz com a Neo Biotech Taq II DNA polimerase.
Agitar bem a solução de MgCl2 após a descongelação.

Desenho de primers

Os iniciadores da PCR devem variar entre 15-30 bases e flanquear a região de interesse.
Os primers devem conter 40-60% de conteúdo GC e evitar sequências que possam produzir uma estrutura secundária interna.
As extremidades 3'dos iniciadores não devem ser complementares para evitar a formação de dímeros de iniciadores.
Evitar três nucleótidos G ou C consecutivos perto da extremidade 3'para evitar o recozimento não específico do iniciador.
Idealmente, ambos os primers devem ter temperaturas de fusão (Tm) quase idênticas para um recozimento eficaz.

Modelo de ADN

A quantidade recomendada de ADN genómico modelo é de 10 ng a 500 ng, mas podem ser utilizados apenas 5 pg.
Quantidades inferiores podem ser suficientes para a amplificação de ADN menos complexo (1-20 ng).
Ao utilizar a síntese de cADN como modelo, não exceder 10% do volume final da reação de PCR.

Ensaios de controlo de qualidade

A Taq II DNA polimerase é testada quanto à pureza, sendo a pureza >90% determinada por eletroforese em gel de poliacrilamida SDS e coloração com Coomassie Blue.
A contaminação do ADN genómico é avaliada através de PCR e não deve ser detetável.

Ensaios de nuclease

Os ensaios de nuclease são efectuados utilizando ADN plasmídico pNZY28 e Neo Biotech Taq II DNA polimerase, seguidos de visualização num gel de agarose corado com GreenSafe Premium.
Não devem ser observados cortes ou cortes visíveis do ácido nucleico. São efectuados testes semelhantes com o

Ensaio funcional

A Taq II DNA polimerase foi extensivamente testada quanto ao seu desempenho na amplificação por PCR de fragmentos de ADN de diferentes tamanhos a partir de ADN genómico humano.
Os produtos PCR resultantes devem aparecer como bandas únicas numa agarose corada.